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雌二醇、孕酮对雌性绵羊生殖道β-防御素表达影响的研究

作　者: 李淑凤
导　师: 曹贵方
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 绵羊 β-防御素 相对表达量 实时荧光定量RT-PCR 同期发情 电化学发光免疫 雌二醇 孕酮
分类号: S826
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 76次
引　用: 2次
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内容摘要


内源性抗微生物肽是生物体内先天性免疫的重要组成成分,防御素(defensins)是其中一大家族。β-防御素是防御素家族中的重要成员之一,它主要分布于哺乳动物和鸟类的粘膜上皮组织内,被认为是黏膜表面抗微生物屏障的重要组成成分。关于生殖道β-防御素的研究主要涉及人类、小鼠;国内外学者对家畜,反刍动物生殖道防御素研究较少。本文应用电化学发光免疫法测定血清中雌二醇、孕酮的浓度;应用荧光定量RT-PCR法检测绵羊生殖道β-防御素(sBD-1)的相对表达量,就雌性绵羊生殖道sBD-1的表达与血清中雌二醇、孕酮含量之间的关系进行系统的研究。结果显示:绵羊输卵管、子宫、宫颈、阴道4个器官内sBD-1的相对表达量差异显著,其中宫颈sBD-1的相对表达量明显高于阴道(P＜0.01),高于子宫和输卵管(P＜0.05);子宫sBD-1的相对表达量高于阴道(P＜0.05),但是与输卵管差异不显著(P＞0.05);输卵管sBD-1的相对表达量高于阴道(P＜0.05)。随发情时间的不同,同一器官内sBD-1的相对表达量呈规律性变化,发情周期各阶段差异显著(P＜0.05)。发情第六、九、十二天sBD-1的相对表达量明显高于发情当天(P＜0.01),高于发情第三天(P＜0.05),而发情第六、九、十二天之间sBD-1的相对表达量差异不显著(P＞0.05);发情第三天sBD-1的相对表达量高于发情当天(P＜0.05)。运用回归方程分析雌二醇及孕酮浓度与sBD-1的相对表达量变化的相关性,结果表明,雌二醇浓度与sBD-1的相对表达量的相关系数R~2=0.9146,孕酮浓度与sBD-1的相对表达量的相关系数R~2=0.9175,表明发情期雌二醇及孕酮浓度的变化均与sBD-1的相对表达量变化呈正相关。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-10
1 引言  10-27
  1.1 β-防御素的研究进展  10-24
    1.1.1 β-防御素的发现及其分布  10-13
    1.1.2 β-防御素的结构特征  13-15
    1.1.3 β-防御素基因的表达调节  15-16
    1.1.4 β-防御素的生物学活性、机制及其影响因素  16-21
    1.1.5 β-防御素的生物合成  21
    1.1.6 β-防御素的应用  21-23
    1.1.7 β-防御素的研究展望  23-24
  1.2 性激素的研究进展  24-26
    1.2.1 性激素的分类及来源  24
    1.2.2 性激素的生理作用  24-26
  1.3 本研究的目的、意义  26-27
2 实验一 绵羊的同期发情  27-29
  2.1 实验材料  27
    2.1.1 实验动物  27
    2.1.2 主要药品与器材  27
  2.2 实验方法  27
    2.2.1 同期发情羊的选择  27
    2.2.2 放栓  27
    2.2.3 同期发情处理  27
    2.2.4 羊的发情鉴定  27
  2.3 实验结果  27-28
    2.3.1 雌性绵羊的同期发情结果  27-28
    2.3.2 同期发情羊卵巢图  28
  2.4 讨论  28
  2.5 小结  28-29
3 实验二 血清中雌二醇及孕酮浓度的测定  29-32
  3.1 材料与方法  29
    3.1.1 材料  29
    3.1.2 主要仪器设备及试剂  29
    3.1.3 雌二醇及孕酮浓度的测定  29
  3.2 结果  29-30
    3.2.1 发情期绵羊血清中雌二醇及孕酮的浓度,  29
    3.2.2 雌二醇及孕酮浓度随时间变化曲线  29-30
  3.3 讨论  30-32
  3.4 小结  32
4 实验三 绵羊生殖道sBD-1表达量在发情周期不同阶段的变化规律  32-45
  4.1 材料与方法  32-36
    4.1.1 材料  32
    4.1.2 主要仪器设备及试剂  32-33
    4.1.3 PCR引物设计  33
    4.1.4 生殖系统器官总RNA的提取  33
    4.1.5 实时荧光定量RT-PCR  33-36
    4.1.6 RT-PCR产物检测及PCR产物序列测定  36
    4.1.7 氨基酸序列分析  36
    4.1.8 实验数据处理  36
  4.2 结果  36-44
    4.2.1 绵羊生殖道各器官RNA及RT-PCR结果  36-39
    4.2.2 sBD-1与β-Actin的扩增效率曲线及扩增曲线  39-40
    4.2.3 RT-PCR产物特异性检测  40-41
    4.2.4 雌性绵羊生殖道各器官RT-PCR结果  41-43
    4.2.5 sBD-1的相对表达量变化与性激素浓度的相关性分析  43-44
  4.3 讨论  44-45
    4.3.1 发情周期不同时期sBD-1的相对表达量变化  44
    4.3.2 雌二醇、孕酮浓度与sBD-1的相对表达量之间的相关关系  44-45
  4.4 小结  45
5 结论  45-47
致谢  47-48
参考文献  48-56
作者简介  56

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 羊
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