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Ⅲ型效应蛋白HopU1结构及其底物GRP7的ADP核糖基化

作　者: 林炎
导　师: 徐彦辉
学　校: 复旦大学
专　业: 生物化学及分子生物学
关键词: HopUI GRP7 单ADP核糖基化酶 ITC ESI-MS
分类号: Q51
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

三型蛋白分泌系统(T3SS)是一种小分子注射装置,许多植物和动物病原利用这个装置,特异性地将称为效应子的细菌蛋白直接注射到宿主细胞内。假单胞菌种属pv. Tomato DC3000病原通过三型蛋白分泌系统将它的效应蛋白HopU1转到拟南芥和西红柿中,抑制这些植物的免疫应答。HopU1是在植物病原菌中第一个得到鉴定的单ADP核糖基转移酶,它的底物是一种含甘氨酸富集域的RNA结合蛋白——GRP7,对已知的ADP核糖基转移酶来说也是很的一种很新的底物。HopU1将ADP核糖基转移到GRP7的第47位和第49位的精氨酸上(这两个氨基酸对植物内源免疫很重要),从而对植物的生理活性产生很大影响。虽然在动物中,ADP核糖转移酶的研究已经很透彻,但是在植物病原中,没有ADP核糖转移酶结构的相关报道。在这篇文章中,我们会阐述分辨率为2.7A的HopU1晶体结构。从整体上来看HopU1的结构,它采用了一种典型的“4条β链核心”域,这个域包括ARTT结构和PNloop,这与其他的已知ADP核糖基转移酶的结构类似。很有趣的是HopU1有两个独有的loop(L1和L4),这个与其他ADP核糖基转移酶的结构有很大不同。系统结构和生化实验证明Ll,L4和ARTT结构对底物的识别和相应的酶活有很大作用。总而言之,相关的实验解释了植物病原中第一个被鉴定的单核糖基化酶HopU1底物识别机制和酶活机制。

全文目录

缩略词  3-4
摘要  4-5
Abstract  5-6
第一章引言  6-15
  1.1 三型蛋白分泌系统概述  6
  1.2 三型效应蛋白概述  6-7
  1.3 ADP核糖基化转移酶  7-12
  1.4 HopU1相关背景知识介绍  12-14
  1.5 本文的主要研究内容、目的、意义及创新点  14-15
第二章 HopU1及其底物GRP7蛋白表达纯化与组装  15-34
  2.1 材料与方法  15-24
  2.2 结果  24-34
第三章 HopU1及其底物GRP7晶体生长及结构解析  34-43
  3.1 材料与方法  34-35
  3.2 结果  35-43
第四章 HopU1晶体结构分析和功能研究  43-65
  4.1 材料与方法  43-54
  4.2 结果  54-62
  4.3 讨论  62-65
结论  65-66
参考文献  66-67
已发表文章  67-68
致谢  68-69

Ⅲ型效应蛋白HopU1结构及其底物GRP7的ADP核糖基化

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