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重组EpoAB-NGF模拟肽在大肠杆菌中的表达、纯化及生物活性初步研究

作　者: 潘勇昭
导　师: 陈虹
学　校: 北京协和医学院
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: EpoAB NGF9/12 神经营养保护 EAE
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 18次
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内容摘要


红细胞生成素(Epo)最先作为一个促进红细胞生成的生长因子被确认,后来发现其在神经、血管等系统中具有不依赖于红细胞生成作用的细胞营养保护功能,并且这种营养保护作用已经被定位到了其序列中一个由17个氨基酸组成的多肽顺序上,称作EpoAB肽(AEHCSLNENITVPDTKV)。神经生长因子(NGF)可通过结合靶细胞膜上的高/低亲和力受体(Trk/p75NTR)调控神经元的存活、增殖、分化、突触生长和凋亡等生命过程,有较好的临床应用前景。本室利用构建的表达p75NTR的R2L1凋亡细胞模型和噬菌体展示文库筛选出2个有抗凋亡作用的p75NTR的模拟配基,即NGF的模拟肽(NGF9和NGF12)。本研究在前期工作的基础上,构建了原核表达GST-EpoAB-NGF9/12融合蛋白的重组质粒,筛选相应的表达菌株,优化了表达和纯化条件,获得融合蛋白,并通过刺激PC12细胞轴突生长和抑制R2L1细胞去血清凋亡的实验,初步证实了融合蛋白对神经细胞的营养保护作用。另外,尝试建立了EAE动物模型并用Epo和EpoAB进行了初步治疗,为进一步验证EpoAB-NGF9/12在动物体内的活性积累了经验。本研究工作的开展,可为日后研究该重组蛋白的血脑屏障通透性,神经营养保护作用的多能性和可能的作用机制等打下基础,进而探索其在神经损伤、神经退行性病变动物模型或人类相应疾病的临床治疗上的应用前景。

全文目录


中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
缩略语表  7-9
前言  9-13
实验材料  13-23
实验方法  23-37
实验结果  37-52
讨论  52-57
总结  57-58
参考文献  58-61
附录  61-62
综述  62-71
  参考文献  68-71
作者简介  71-72
致谢  72-73

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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程（遗传工程）
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