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sFrp2和sFrp3在小鼠磨牙发育中的作用

作　者: 韩萍萍
导　师: 张彦定
学　校: 福建师范大学
专　业: 发育生物学
关键词: sFrp2 and sFrp3 慢病毒 Wnt信号通路 牙齿发育
分类号: Q954.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


在研究器官发育的分子机制中,牙齿发育是常用的研究模型之一。Wnt信号通路是公认的在胚胎发育过程中对图式形成和分化起指导作用的一种重要的信号系统,在牙齿的发育和分化过程也起着关键作用。分泌性Frizzled相关蛋白(the secreted frizzled-related, sFRPs)在功能上作为Wnt信号的可溶性调控因子,通过与Wnt配体竞争与膜上的Frizzled受体的结合,将Wnts配体与Frizzled受体隔离,同时阻断了经典的和平行极性通路,从而达到拮抗Wnt信号的作用。已有的研究已经证实,有多种的Wnt配体和受体及其调控因子在发育分化牙胚组织中表达。我们的研究发现,sFrp2和sFrp3在E11.5-E13.5的小鼠磨牙牙胚的间充质中持续表达。显然,该两种因子参与了牙齿发育过程的Wnt信号通路的调控。利用慢病毒介导的过表达和RNAi技术,调节E13.5小鼠牙胚间充质中sFrp2和sFrp3的表达水平。其中发现可以将牙胚间充质细胞中的sFrp2或sFrp3的表达水平下调至原表达水平的20%左右。sFrp2和sFrp3被共抑制后3天sFrp2, sFrp3的表达量均下调了至原表达量的15%左右,而Axin2相对表达量较对照组明显上调了1.17倍,说明Wnt/β-catenin经典信号通路被大量激活；而sFrp2和sFrp3共抑制后5天sFrp2、sFrp3均下调至原表达量的25%。将病毒感染过的牙间充质细胞聚合并与E13.5的牙上皮组织重组后,植入小鼠肾脏囊膜下进一步发育。结果发现,单一过表达sFrp2和下调sFrp2或sFrp3时,并不影响牙齿的发育和形态分化,sFrp2和sFrp3之间显然存在功能互补作用。但同时下调sFrp2和sFrp3,牙齿的形态发生出现明显异常。成釉质细胞分化受阻,釉质几乎无法形成；成牙本质细胞分化也不正常,牙本质分泌量明显减少；并且最终形成的牙齿中没有牙釉质。可以认为,sFrps在Wnt信号通路的调控中起重要作用。

全文目录


摘要  2-3
Abstract  3-5
中文文摘  5-9
绪论  9-19
  1 牙齿发育的模式和过程  9-10
  2 牙齿发育的分子调控机制  10-12
  3 Wnt信号通路及其作用  12-14
  4 Axin2在牙齿发育中的作用  14-15
  5 慢病毒载体及RNAi技术  15-18
  6 本研究的意义和目的  18-19
第1章 实验材料与方法  19-27
  1.1 实验材料  19-21
  1.2 实验方法  21-27
第2章 实验结果  27-45
  2.1 慢病毒的生产  27-29
  2.2 sFrp2在磨牙间充质中过表达和RNAi对牙齿发育的影响分析  29-31
  2.3 sFrp2、sFrp3共抑制磨牙间充质后对牙齿发育的影响分析  31-42
  2.4 sFrp2和sFrp3在牙间充质中共抑制3天后Axin2表达水平的检测  42-45
第3章 分析与讨论  45-49
  3.1 慢病毒的生产  45-46
  3.2 慢病毒感染磨牙间充质细胞  46
  3.3 Real-time PCR法检测sFrp2和sFrp3的表达  46
  3.4 磨牙间充质中sFrp2和sFrp3的表达对牙齿发育的影响  46-49
第4章 结论  49-51
附录1  51-53
附录2  53-55
参考文献  55-65
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果  65-67
致谢  67-69
个人简历  69-71

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中图分类: > 生物科学 > 动物学 > 动物形态学 > 动物胚胎学（动物发生学、动物胎生学）
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