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COⅠ和ITS2基因序列在蒲螨属分子鉴定中的应用研究

作 者: 贺丽敏
导 师: 刘敬泽;于丽辰
学 校: 河北师范大学
专 业: 动物学
关键词: 蒲螨属 COI ITS2 种的鉴定 系统发育
分类号: Q959
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要


蒲螨(Pyemotes)全部为昆虫外寄生螨,是隐蔽性、群居性害虫的潜在生物制约因子。蒲螨个体微小,体长仅200μm左右,可供分类鉴定的形态特征较少,分类体系尚不完善,尤其是对形态接近的种类缺少有效的区分方法。近年来基于DNA分子标记技术的应用,为物种的鉴定提供参考数据。本研究选用了9个蒲螨种群,每个种群随机抽取3-5个样本进行mtDNA-COI基因和核糖体ITS2基因克隆,通过对其序列分析来探讨蒲螨属种的鉴定及其系统发育,为蒲螨的分类提供分子生物学证据,主要结论如下:1、基于mtDNA COI基因序列分析表明,从蒲螨9个种群中都扩增出了453bp的COI基因片段,其中A+T含量平均为70.4%,显示出较强的AT偏倚。根据种群间COI基因进化分歧和系统发育树分析将球腹蒲螨群的6个种群分为3个独立的种,与生物学和生态学观察结果一致。2、利用COI基因序列对蒲螨9个种群进行物种鉴定,种间进化分歧在11.9%—17.1%,种内进化分歧为0-1.3%;通过系统发育分析,球腹蒲螨群种群5(SSXD)与小蠹蒲螨群亲缘关系近。3、采用直接测序法对核糖体DNA中ITS2区段序列进行测定和分析。最终从蒲螨9个种群中都扩增出了449-491bp左右的ITS2片段,G+C含量平均为32.0%。种的确定与COI鉴定种的结果一致,种间进化分歧7.0%-17.8%,种内进化分歧为0-0.6%。4、COI和ITS2在对Pyemotes进行物种鉴定时起到了相同的作用,成功将Pyemotes鉴定到种级水平。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-8
第一章 文献综述  8-15
  1.1 蒲螨分类系统  8-9
  1.2 蒲螨近缘种研究  9
  1.3 线粒体DNA多态性在蜱螨系统学研究中的应用  9-12
    1.3.1 线粒体DNA的特点  9-10
    1.3.2 COI基因的结构  10
    1.3.3 COI基因的遗传和进化特点  10-11
    1.3.4 COI基因在蜱螨物种鉴别和系统发育方面的应用  11-12
  1.4 核糖体DNA多态性在蜱螨系统学研究中的应用  12-14
    1.4.1 核糖体DNA的特点  12
    1.4.2 rDNA的ITS2基因的结构  12-13
    1.4.3 ITS2基因的遗传和进化特点  13
    1.4.4 ITS2基因在蜱螨物种鉴别和系统发育方面的应用  13-14
  1.5 问题与展望  14-15
第二章 蒲螨属mtDNA COI基因序列分析及系统发育研究  15-27
  2.1 引言  15
  2.2 材料与方法  15-19
    2.2.1 供试材料  15-16
    2.2.2 杂交试验  16
    2.2.3 蒲螨总DNA的提取  16-17
    2.2.4 PCR扩增体系和条件  17
    2.2.5 COI基因PCR产物的回收与纯化  17-18
    2.2.6 纯化片段的连接  18
    2.2.7 连接产物转入大肠杆菌  18-19
    2.2.8 序列测定  19
    2.2.9 序列分析  19
  2.3 结果  19-24
    2.3.1 镜检与杂交试验结果  19-20
    2.3.2 蒲螨9个种群COI基因的扩增与克隆  20
    2.3.3 天敌蒲螨mtDNA—COI基因序列分析  20-21
    2.3.4 系统发育分析  21-24
  2.4 讨论  24-27
第三章 蒲螨属9个种群核糖体DNA-ITS2序列分析及系统发育研究  27-33
  3.1 引言  27
  3.2 材料与方法  27-28
    3.2.1 供试材料  27
    3.2.2 蒲螨总DNA的提取  27
    3.2.3 PCR扩增体系和条件  27-28
  3.3 结果  28-31
    3.3.1 ITS2基因的扩增与克隆  28
    3.3.2 天敌蒲螨rDNA—ITS2基因序列分析  28-29
    3.3.3 系统发育分析  29-31
  3.4 讨论  31-33
结论  33-34
参考文献  34-42
致谢  42

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中图分类: > 生物科学 > 动物学 > 动物分类学(系统动物学)
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