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紫茎泽兰提取物对细菌的抑制作用及抑菌机理的研究
作 者: 李丽萍
导 师: 谢响明
学 校: 北京林业大学
专 业: 微生物
关键词: 紫茎泽兰 氯仿萃取物 番茄青枯菌 抑菌机理
分类号: S482.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要
本研究用70%的乙醇提取紫茎泽兰,将所得到的提取液旋转蒸发成浸膏,再依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇、丙酮按照极性由小到大萃取,得到不同极性段的活性物质。然后用这些有机溶剂萃取液对5种供试菌进行抑菌试验,筛选出抑菌效果最好的萃取液,以及对这种萃取液最敏感的菌株。经试验得出紫茎泽兰氯仿萃取液对番茄青枯菌有较好的抑制作用,并从抑制剂在生理、生化、细胞形态等方面对番茄青枯菌的抑菌机理进行了深入研究,结果如下:1.紫茎泽兰70%乙醇提取液对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、大肠杆菌(Escherichia coli)的最低抑菌浓度均为0.25g/ml,对番茄抑制作用最为显著,其抑菌浓度低达0.0625g/ml,以青枯菌为指示菌。研究了紫茎泽兰提取物的稳定性。结果表明,提取物的抑菌活性具有较好的热稳定性,在pH为9时抑菌效果较佳;2.石油醚和丙酮萃取液对所有供试菌均没有抑制作用,氯仿萃取液对番茄青枯菌(Rastonia solanacearum)的抑制作用较明显;3.氯仿萃取液中添加Zn2+和Mn2+,乙醚萃取液中添加Zn2+抑菌作用有所增加,其他处理抑菌效果没有明显改变;随着随着乙醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇四种有抑菌活性的萃取液中加入的蔗糖和NaCl溶液浓度的增大。抑菌效果也逐渐增强;4.抑菌机理研究:通过SDS-PAGE电泳的方法检测发现,氯仿萃取液完全抑制或破坏了菌体小分子蛋白质的合成,对大分子蛋白质也有一定的抑制作用;透射电镜观察可知氯仿萃取液破坏了菌体形态;通过酶活测定可知氯仿萃取液抑制了番茄青枯菌的POD、CAT、SDH酶活,且随着加入萃取液浓度的增大,抑制作用也逐渐增强。总之,紫茎泽兰氯仿萃取液扰乱了菌体细胞内正常的代谢活动,导致细胞不再生长、繁殖,达到抑菌的目的。以上研究成果对于番茄青枯病防治的应用有一定的指导意义。
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全文目录
中文摘要 3-4 ABSTRACT 4-8 引言 8-9 1 文献综述 9-16 1.1 紫茎泽兰的危害及生物学特性 9 1.2 紫茎泽兰的利用 9-10 1.2.1 工业用途 9 1.2.2 作为染料 9-10 1.2.3 生产生物农药 10 1.2.4 药用价值 10 1.3 紫茎泽兰的化学成分的研究进展 10-13 1.4 紫茎泽兰化学成分的生物学活性研究进展 13-14 1.4.1 杀虫活性 13 1.4.2 紫茎泽兰的化学成分对昆虫的拒食作用 13 1.4.3 紫茎泽兰的抑菌成分 13-14 1.4.4 紫茎泽兰的毒性 14 1.5 植物农药的开发利用现状 14-16 1.5.1 植物农药的意义 14 1.5.2 植物农药的研究现状 14-15 1.5.3 植物农药研究中的问题 15-16 2 紫茎泽兰脂溶性成分的提取和分离 16-18 2.1 材料与方法 16-17 2.1.1 供试植物样品 16 2.1.2 供试试剂 16 2.1.3 试验仪器与设备 16 2.1.4 试验内容和设计 16-17 2.2 试验结果 17-18 3 紫茎泽兰乙醇提取物抑制细菌试验 18-22 3.1 材料与方法 18-19 3.1.1 试验材料和仪器 18 3.1.2 试验方法 18-19 3.2 试验结果与分析 19-21 3.2.1 敏感菌株的筛选 19 3.2.2 MIC试验 19-20 3.2.3 不同提取设备的抑菌效果比较 20-21 3.3 小结 21-22 4 乙醇提取物浸膏的不同有机溶剂萃取液抑菌试验 22-30 4.1 材料和方法 22-23 4.1.1 试验材料和仪器 22 4.1.2 试验方法 22-23 4.2 试验结果与分析 23-29 4.2.1 不同有机溶剂萃取物抑菌试验 23-24 4.2.2 pH对抑菌效果的影响 24-25 4.2.3 耐热性试验 25-26 4.2.4 金属离子对有机溶剂萃取液抑菌效果的影响 26-28 4.2.5 蔗糖和NaCl对氯仿萃取液抑菌效果的影响 28-29 4.3 小结 29-30 5 紫茎泽兰氯仿萃取物对番茄青枯菌的抑菌机理研究 30-47 5.1 材料和方法 30-31 5.1.1 试验材料和仪器 30-31 5.1.2 试验仪器 31 5.2 试验方法 31-37 5.2.1 紫茎泽兰氯仿萃取物对番茄青枯菌生长曲线的影响 31-32 5.2.2 紫茎泽兰氯仿萃取物对番茄青枯菌利用糖的影响 32-33 5.2.3 紫茎泽兰氯仿萃取物对番茄青枯菌蛋白含量的影响 33-34 5.2.4 紫茎泽兰氯仿萃取物对番茄青枯菌细胞形态的影响 34 5.2.5 SDS.PAGE 34-35 5.2.6 对呼吸代谢的影响 35-36 5.2.7 紫茎泽兰氯仿萃取物对番茄青枯菌过氧化物酶的影响 36 5.2.8 紫茎泽兰氯仿萃取物对番茄青枯菌过氧化氢酶的影响 36-37 5.2.9 紫茎泽兰氯仿萃取物对番茄青枯菌琥珀酸脱氢酶的影响 37 5.3 试验结果与分析 37-45 5.3.1 紫茎泽兰氯仿萃取物对番茄青枯菌生长曲线的影响 37-38 5.3.2 紫茎泽兰氯仿萃取物对番茄青枯菌利用糖的影响 38-39 5.3.3 紫茎泽兰氯仿萃取物对番茄青枯菌蛋白含量的影响 39 5.3.4 透射电镜观察结果 39-41 5.3.5 SDS.PAGE 41-42 5.3.6 对呼吸代谢的影响 42-43 5.3.7 紫茎泽兰氯仿提取物对番茄青枯菌POD、CAT的影响 43-44 5.3.8 紫茎泽兰氯仿提取物对番茄青枯菌琥珀酸脱氢酶的影响 44-45 5.4 小结 45-47 6 结论 47-48 7 展望与建议 48-50 附录 50-56 参考文献 56-60 个人简介 60-61 导师简介 61-62 致谢 62
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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 农药防治(化学防治) > 各种农药 > 杀菌剂
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