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卵巢癌淋巴结定向高转移相关差异表达蛋白的鉴定及验证

作　者: 倪萍
导　师: 黎丹戎
学　校: 广西医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 卵巢癌 淋巴结定向转移 荧光定量PCR ERAP1、MRPS27H3F3A、BFSP1 纳升HPLC电喷雾串联质谱
分类号: R737.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 42次
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内容摘要


目的通过蛋白质组学技术对卵巢癌淋巴结定向高转移和非定向转移细胞间差异表达蛋白质进行分离,鉴定,并验证ERAP1、MRPS27、H3F3A、BFSP等四个差异蛋白在卵巢癌不同淋巴结转移能力细胞亚系的表达情况。方法分别通过二维液相结合质谱和纳升HPLC联合电喷雾串联质谱两种蛋白质组学技术筛选出卵巢癌淋巴结定向高转移和非定向转移细胞间差异表达蛋白。采用TRIZOL一步法抽提卵巢癌不同淋巴结转移能力细胞的总RNA,逆转录合成CDNA,实时荧光定量PCR技术对ERAP1、MRPS27、H3F3A.BFSP等四个差异表达的蛋白在不同细胞亚系的表达进行定量分析。结果二维液相结合质谱鉴定出卵巢癌淋巴结定向高转移和非定向转移细胞间差异蛋白13个：Apolipoprotein E receptor 2, Huntingtin interacting protein, Adipocyte-derived leucine aminopeptidase variant, AF039655NID, H3 histone, family 3A, SH2D1A protein, BFSP1 protein, AF090938NID, hypothetical protein, Poly(A) binding protein, Candidatus Pelagibacter ubique HTCC1002, AX973019NID。纳升HPLC联合电喷雾串联质谱鉴定出差异蛋白共14个,分别是HNRH3(不均一核糖核酸核内核糖核蛋白体),趋化因子CXCL1, Galectin-7(Gal-7)半乳糖凝集素7,MRP-14(移动抑制因素相关蛋白),Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(甘油醛-3-磷酸脱氢酶),SCCA-1(鳞状细胞癌抗原1),Calmodulin-like protein 5(钙调节蛋白5),Alpha-enolase(烯醇化酶1),CathepsinD(组织蛋白酶D),Heat-shock proteinbeta-1(热休克蛋白),Annexin A2(膜连蛋白A2),Protein POF 1B(卵巢功能早衰蛋白),荧光定量PCR结果表明：ERAP1、H3F3A、MRPS27基因在SKOV3、SKOV3-PM2、SKOV3-PM3、KOV3-PM4细胞系中的表达呈下降趋势,BFSP1基因的表达量在SKOV3、SKOV3-PM2、SKOV3-PM3、SKOV3-PM4细胞系无明显差异。与PF-2D结合ESI-MS质谱鉴定的结果不相符。结论经过PF2D分离获得的差异蛋白混合度较高,未经过进一步分离直接质谱鉴定结果不太可靠,而再经过纳升HPLC进一步分离后进行质谱鉴定结果较理想。差异蛋白涉及到组织蛋白酶、基质金属蛋白酶及蛋白酶抑制剂、细胞粘附／细胞-基质作用因子和信号转导通路等方面。其中ERAP1、SH2D1A、H3F3A、SFRP1表达下调与卵巢癌的淋巴结定向高转移过程密切相关。

全文目录


英文缩略词表  5-7
正文:卵巢癌淋巴结定向高转移与非定向转移细胞系间差异性表达蛋白的鉴定与验证  7-124
  中文摘要  7-9
  英文摘要  9-11
  第一章 卵巢恶性肿瘤浸润转移诊断治疗进展(文献综述)  11-62
    1. 卵巢癌转移途径  11-20
      1.1 淋巴结转移  12-15
      1.2 局部蔓延  15
      1.3 种植转移  15-17
      1.4.血行转移  17
      1.5 恶性肿瘤微转移  17-20
    2.卵巢癌浸润转移的基本过程  20-23
    3.卵巢恶性肿瘤浸润转移的主要分子机理  23-28
    4.信号转导通路与卵巢恶性肿瘤浸润转移  28-31
    5.细胞粘附分子与卵巢恶性肿瘤转移  31-35
    6 蛋白降解酶与卵巢恶性肿瘤转  35-38
    7.血管生成与卵巢癌转移  38-42
    8.卵巢肿瘤及淋巴结转移的主要诊断模式及存在问题  42-62
      8.1 物理诊断  42-47
      8.2 肿瘤标志物检测  47-50
      8.3 基因组学和蛋白质组学检测技术  50-62
  第二章 应用Real-time-PCR技术对卵巢癌淋巴结定向高转移与非定向转移细胞系差异性蛋白的验证  62-88
    一、前言  62-63
    二、材料与方法  63-74
    三、实验结果  74-82
    四、讨论  82-85
    五、参考文献  85-88
  第三章 纳升HPLC联合电喷雾串联质谱技术对卵巢癌淋巴结定向高转移差异表达蛋白质组鉴定  88-124
    一、前言  88-89
    二、材料与方法  89-93
    三、实验结果  93-110
    四、讨论  110-120
    五、参考文献  120-124
全文小结  124-125
研究生阶段参与的课题  125-126
致谢  126

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 卵巢肿瘤
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