学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

siRNA沉默Trop2基因表达对胃癌BGC823细胞迁移侵袭能力的影响

作　者: 戴东方
导　师: 陈德玉
学　校: 江苏大学
专　业: 肿瘤学
关键词: Trop2基因 RNA干扰 胃癌 迁移 侵袭
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 69次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的：构建在哺乳动物细胞中表达Trop2的重组质粒并作用于胃癌BGC823细胞株,探讨重组质粒对BGC823细胞株Trop2 mRNA及蛋白的抑制作用,以及对胃癌BGC823细胞迁移侵袭能力的影响。方法：根据GenBank数据库提供的Trop2基因核苷酸序列设计三条多聚核苷酸序列,构建三条干扰重组质粒pGenesill.1-Trop21、pGenesill.1-Trop22、pGenesill.1-Trop23;在脂质体的介导下瞬时转染入人胃癌BGC823细胞株,优化转染条件,荧光倒置显微镜下观察转染效率；用实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR, QRT-PCR)和Western blot分析Trop2 mRNA,及蛋白的表达；Transwell小室实验测定干扰重组质粒对BGC823细胞株的的迁移侵袭能力的影响。结果：(1)酶切鉴定和DNA测序分析显示,Trop2靶向RNA干扰重组质粒构建成功。(2)细胞转染条件的优化及转染效率的观察：当所构建重组质粒与脂质体的质量体积比为1：4转染时,转染效率最高达75%。(3) QRT-PCR及Western blot的结果：干扰重组质粒均能使胃癌BGC823细胞株中Trop2 mRNA及蛋白的表达下调。pGenesill.1-Trop21组、pGenesill.1-Trop22组、pGenesill.1-Trop23组对Trop2 mRNA抑制率分别为23.9%、23.7%、29.9%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；Trop2蛋白抑制率达分别为32.8%、25.5%、62.0%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。筛选得到pGenesill.1-Trop23作为最佳干扰效果质粒进行后续实验。(4)迁移侵袭实验结果：体外迁移实验示pGenesill.1-Trop23作用BGC823细胞株48小时后,穿过Matrigel膜的细胞个数为(43±6)个,与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05)。体外侵袭实验示pGenesill.1-Trop23作用BGC823细胞株48小时后,穿过Matrigel膜的细胞个数为(23±5)个,与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05)。结论：干扰重组质粒pGenesill.1-Trop21、pGenesill.1-Trop22、pGenesill.1-Trop23均能有效抑制人胃癌BGC823细胞株Trop2 mRNA和蛋白的表达,最佳干扰质粒pGenesill.1-Trop23能降低人胃癌细胞的迁移侵袭力,为进一步研究以Trop2为靶点的抗肿瘤治疗奠定了基础。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-11
第一章 绪论  11-19
  1.1 胃癌简介  11
  1.2 Trop2基因概述  11-13
    1.2.1 Trop2基因  11-12
    1.2.2 Trop2作为抗肿瘤治疗的靶位  12-13
  1.3 RNAi研究现状  13-16
    1.3.1 RNAi现象的发现  13-14
    1.3.2 RNAi的作用机制  14-16
    1.3.3 RNAi的应用  16
  1.4 实时荧光定量PCR研究进展  16-19
    1.4.1 实时荧光定量PCR的技术原理  16-17
    1.4.2 实时荧光定量PCR在肿瘤研究中的应用  17-19
第二章 Trop2特异性siRNA载体的构建及鉴定  19-29
  2.1 材料与方法  19-25
    2.1.1 材料  19-21
    2.1.2 实验方法和步骤  21-25
  2.2 结果  25-26
    2.2.1 质粒的鉴定  25-26
    2.2.2 质粒测序结果  26
  2.3 讨论  26-29
第三章 QRT-PCR和Western blot法检测Trop2的表达  29-45
  3.1 材料与方法  29-38
    3.1.1 材料  29-31
    3.1.2 实验方法和步骤  31-38
  3.2 结果  38-42
    3.2.1 质粒转染和阳性细胞的筛选  38
    3.2.2 QRT-PCR结果  38-41
    3.2.3 Western blot结果  41
    3.2.4 最佳干扰质粒筛选  41-42
  3.3 讨论  42-45
第四章 Tanswell小室检测胃癌细胞株迁移侵袭性的改变  45-49
  4.1 材料与方法  45-46
    4.1.1 材料  45
    4.1.2 实验方法和步骤  45-46
  4.2 结果  46-47
    4.2.1 Transwell小室细胞迁移试验结果  46-47
    4.2.2 Transwell小室细胞侵袭试验结果  47
  4.3 讨论  47-49
结论  49-50
参考文献  50-54
英文缩写索引  54-56
致谢  56-57
攻读硕士期间发表的论文  57

相似论文

  1. 冬凌草甲素调控周期相关蛋白抑制SGC-7901细胞增殖作用的研究,R285
  2. 高位精养模式日本囊对虾生长及浮游生物演替规律,S968.22
  3. CADPE抗肿瘤作用及对胃癌细胞凋亡的影响,R735.2
  4. 流动人口的户籍迁移意愿及其影响因素的分析,C924.2
  5. 甜菜夜蛾信息素结合蛋白的表达动态及其受交配和钟基因沉默的影响,S433.4
  6. 棉铃虫NADPH-细胞色素P450还原酶基因的克隆、时空表达及RNA干扰,S435.622.3
  7. 马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因的克隆、表达分析及其dsRNA的发酵生产,S435.32
  8. 几种新型杀虫剂对马铃薯甲虫的毒力及两类靶标的分子克隆,S435.32
  9. 人源志贺菌对SPF雏鸡、鸡肠上皮原代细胞的侵袭性及肠组织CD44分子的时空性表达研究,S855.1
  10. 慢病毒载体介导的RNAi特异性沉默猪Myostatin基因的研究,S828
  11. 郁仁存教授学术思想和临床经验总结与益气活血解毒方联合化疗治疗晚期胃癌的临床观察,R249
  12. PTEN、Caspase-7在胃癌与癌前病变中表达及意义,R735.2
  13. 沉默Bmi-1表达对A549细胞增殖和侵袭转移的作用,R730.2
  14. 缺氧诱导的上皮—间质转化与肝癌细胞侵袭力的关系研究,R735.7
  15. 靶向Bcl-xl的RNAi对胰腺癌细胞增殖凋亡及对吉西他滨化疗敏感性影响的实验研究,R735.9
  16. 细胞色素b基因RNA干扰载体的构建及拟南芥的遗传转化,Q943
  17. 胰岛素通过缺氧诱导因子1α信号途径增强胰腺癌细胞的增殖活性和侵袭能力,R735.9
  18. Trop2在体外模拟的心梗炎性环境中介导心脏c-kit~+细胞保护作用的研究,R542.22
  19. PARP-1对RAW264.7细胞内HMGB1的定位和分泌的影响,R576
  20. Nav1.5抗体对宫颈癌SiHa、乳腺癌MDA-MB-231和卵巢癌Caov-3细胞迁移和侵袭能力的抑制作用,R737.9;R737.31
  21. MACC1对前列腺癌体外侵袭转移能力的影响,R737.25

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com