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Eu3+和纳米Eu2O3对人肝细胞和肝癌细胞生长的影响
作 者: 刘洁
导 师: 魏春英
学 校: 山西大学
专 业: 无机化学
关键词: 稀土 纳米材料 细胞 生物活性
分类号: R735.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 27次
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内容摘要
随着稀土化合物和稀土纳米氧化物研究的深入与应用的推广,稀土最终会通过食物链到达人体;而稀土粉体从采集到制备的过程中存在的各种暴露也直接会影响人类的健康,因此稀土应用的生物安全性受到人们的大量关注。同时,稀土的生物效应和毒理效应的研究也一直是热点问题。铕(Eu)近年来被广泛应用于生物领域;纳米Eu2O3是一种可发红色荧光的材料。本文运用激光共聚焦显微镜首次观察到纳米Eu2O3颗粒能以团聚体的形式存在于两种细胞的内部,并采用MTT比色法,形态观察和流式细胞术法初步探讨了Eu3+和纳米Eu2O3对体外培养的人肝细胞HL7702和肝癌细胞HepG2生物活性的影响及差异,具体结果如下:1.Eu3+对两种细胞生长的影响:MTT比色法表明Eu3+在较低含量,即≤100μmol·L-1时可促进HL7702生长,能较弱的抑制HepG2的活力,并具有一定的浓度和时间依赖特征;细胞周期检测表明HL7702周期中S期的细胞比率上升,且明显大于对照组;而HepG2细胞则被阻滞在G0/G1期,出现subGo/G1峰;HepG2细胞形态出现凋亡特征且经Annexin V/PI标记流式细胞术检测后验证了凋亡细胞的存在。2.纳米Eu2O3对两种细胞生长的影响:运用激光共聚焦显微镜首次观察到纳米Eu2O3颗粒能存在于两种细胞的内部;MTT法显示纳米Eu2O3均可降低两种细胞的存活率;细胞周期直方图表明纳米Eu2O3在较低浓度时对两种细胞生长的影响较小,较高浓度(≥800μg·mL-1)作用HL7702细胞24 h后,具有明显的毒性作用,出现了凋亡峰;浓度达到600μg·mL-1作用HepG2仅24 h,细胞就停止分裂,被阻滞在S期;HL7702出现凋亡形态,HepG2空泡化现象明显;Annexin V/PI标记法检测细胞凋亡发现HL7702在实验范围内凋亡率最大为17.9%,而HepG2则无显著凋亡。
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全文目录
摘要 10-11 ABSTRACT 11-13 第一章 综述 13-23 1.1 稀土研究概述 13-17 1.1.1 稀土元素定义 13 1.1.2 稀土元素的应用 13-14 1.1.3 稀土元素的生物效应及机制研究 14-16 1.1.4 稀土元素的毒理学研究 16-17 1.2 稀土纳米氧化物的研究现状 17-19 1.2.1 稀土纳米氧化物的应用 17-18 1.2.2 稀土纳米氧化物的生物效应 18 1.2.3 纳米材料对细胞结构和功能的影响 18-19 1.3 稀土对细胞的作用 19-20 1.3.1 稀土跨细胞膜 19 1.3.2 稀土对细胞膜的作用 19 1.3.3 稀土对细胞器的作用 19-20 1.3.4 稀土对细胞信使物质的影响 20 1.3.5 稀土对细胞周期及死亡的影响 20 1.4 本课题研究的背景和意义 20-23 第二章 Eu~(3+)对人肝细胞HL7702和肝癌细胞HepG2生物活性影响的初步研究 23-35 2.1 引言 23 2.2 细胞增殖与细胞凋亡 23-26 2.2.1 细胞增殖及常用检测方法 23-24 2.2.2 细胞凋亡及常用检测方法 24-26 2.3 实验材料及仪器 26-27 2.3.1 实验材料 26 2.3.2 实验仪器 26-27 2.4 细胞株 27 2.5 细胞培养 27 2.6 实验方法 27-28 2.6.1 EuCl_3溶液的制备 27 2.6.2 MTT法测试Eu~(3+)对HL7702和HepG2细胞活力的影响 27-28 2.6.3 PI标记流式细胞术检测细胞周期 28 2.6.4 Eu~(3+)引起HepG2细胞凋亡的检测 28 2.6.4.1 细胞形态学观察 28 2.6.4.2 Annexin V/PI标记流式细胞术检测细胞凋亡 28 2.7 实验结果 28-32 2.7.1 Eu~(3+)对HL7702和HepG2细胞活力的影响 28-29 2.7.2 Eu~(3+)对HL7702和HepG2细胞周期进程的影响 29-31 2.7.3 Eu~(3+)引起HepG2细胞凋亡的检测 31-32 2.7.3.1 倒置显微镜观察HepG2细胞形态改变 31-32 2.7.3.2 Eu~(3+)诱导HepG2细胞凋亡 32 2.8 讨论 32-33 2.9 结论 33-35 第三章 纳米Eu_2O_3对人肝细胞HL7702和肝癌细胞HepG2增殖作用研究 35-47 3.1 引言 35 3.2 实验材料及仪器 35-37 3.2.1 实验材料 35-36 3.2.2 实验仪器 36-37 3.3 细胞株 37 3.4 细胞培养 37 3.5 实验方法 37-38 3.5.1 纳米Eu_2O_3溶液的制备 37 3.5.2 MTT法检测纳米Eu_2O_3对HL7702和HepG2细胞活力的影响 37 3.5.3 PI标记流式细胞术检测细胞周期 37-38 3.5.4 纳米Eu_2O_3引起HL7702和HepG2细胞凋亡的检测 38 3.5.4.1 细胞形态学观察 38 3.5.4.2 Annexin V/PI标记流式细胞术检测细胞凋亡 38 3.5.5 纳米Eu_2O_3跨HL7702和HepG2细胞膜 38 3.6 实验结果 38-45 3.6.1 MTT法检测纳米Eu_2O_3对HL7702和HepG2细胞的毒性作用 38-39 3.6.2 PI标记流式细胞术检测细胞周期 39-41 3.6.3 纳米Eu_2O_3诱导HL7702和HepG2细胞凋亡的检测 41-44 3.6.3.1 倒置生物显微镜观察细胞形态学变化 41-42 3.6.3.2 Annexin V/PI标记流式细胞术检测细胞凋亡 42-44 3.6.4 激光共聚焦显微镜(LSCM)观察纳米Eu_2O_3颗粒跨细胞膜 44-45 3.7 讨论 45-46 3.8 结论 46-47 第四章 总结与展望 47-49 4.1 总结 47-48 4.2 展望 48-49 参考文献 49-59 攻读学位期间取得的研究成果 59-60 致谢 60-61 个人简况及联系方式 61-63
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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