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生精散治疗大鼠弱精子症的实验研究

作　者: 韩彩艳
导　师: 孙伟
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 弱精子症生精散 CatSper通道蛋白男性不育精子运动大鼠
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:本实验拟从两个方面来研究生精散对弱精子症的疗效及其治疗机理,旨在获得科学规范的临床资料,并阐明生精散的作用机制,为生精散治疗弱精子症不育提供科学的理论依据,以期弘扬祖国医学之精髓。本实验对于深入研究精子特异性钙通道蛋白CatSper在弱精子症发生中的作用,进而阐明弱精子症的发病机制,寻找新的临床治疗靶点也具有重要的价值。方法:本实验采用喂服GTW的方法诱导大鼠弱精子症的发生,采用睾丸组织病理学检测(H.E染色)、精液常规分析和精子活力检测的方法,检测大鼠精子的形态与活力,建立弱精子症大鼠模型,同时采用Real-time PCR (mRNA水平检测)与免疫组化的方法,观察四种CatSper通道蛋白(CatSper1-4)在模型大鼠精子质膜上的表达的变化,试图阐明以下问题:1.四种CatSper通道蛋白(CatSper1-4)在模型大鼠精子质膜上的表达是否较对照组减少;2.生精散是否可以通过提高模型大鼠精子质膜CatSper的表达、增强该通道的功能来提高精子的活力。结果:1.大鼠弱精子症模型的建立采用喂服GTW的方法诱导大鼠弱精子症的发生,采用睾丸组织病理学检测(H.E染色)、精液常规分析和精子活力检测的方法,检测大鼠精子的形态与活力。结果表明:GTW组大鼠精子的活率、活力、密度以及直线运动速度(VSL)、平均路径速度(VAP)和曲线运动速度(VCL)等功能指标均较正常对照组和NS组显著降低。睾丸组织H.E染色显示,模型组大鼠生精小管内各级精母细胞和精子细胞数明显减少,生精细胞排列紊乱,表明GTW可以诱导稳定的弱精子症大鼠模型。2.弱精子症大鼠是否有精子特异性钙通道蛋白CatSper的表达减少通过免疫组织化学、Real-time PCR方法分别观察(CatSper1-4)在模型大鼠精子质膜上的表达是否较对照组减少。结果表明:模型组大鼠catsper蛋白表达明显较对照组减少。为进一步研究弱精子症的发生提供了基础。3.生精散具有提高精子的密度、活力、活率及运动速度的作用。通过采用计算机辅助精子分析系统(computer assisted sperm analysis, CASA)检测精子的密度、活力、活率、及运动速度等各项功能指标。结果:生精散可以明显提高模型组精子的密度、活力、活率及运动速度,从而治疗大鼠弱精子症。结论:1.GTW组大鼠精子的活率、活力、密度以及直线运动速度(VSL)、平均路径速度(VAP)和曲线运动速度(VCL)等功能指标均较正常对照组和NS组显著降低。睾丸组织H.E染色显示,模型组大鼠生精小管内各级精母细胞和精子细胞数明显减少,生精细胞排列紊乱,表明GTW可以诱导稳定的弱精子症大鼠模型2.弱精子模型组型组大鼠catsper蛋白表达明显较对照组减少。3.生精散可以明显提高模型组精子的密度、活力、活率及运动速度,从而治疗大鼠弱精子症。

全文目录

提要  3-5
ABSTRACT  5-9
引言  9-10
概述  10-11
  1 目前国内外对于该题目的研究  10
  2 本课题的立题出发点  10-11
实验研究  11-20
  1 研究对象  11-20
    1.1 材料与方法  11-12
    1.2 免疫组织化学检测弱精子症大鼠模型总Catsper 蛋白的表达  12-16
    1.3 Real-time PCR 检测casper 基因的变化  16-19
    1.4 实验数据处理和统计学检验  19-20
实验结果  20-33
  1 弱精子症模型精子活力及形态的检测结果  20-26
    1.1 雷公藤多甙诱导弱精子症大鼠模型的建立  20-22
    1.2 生精散对模型大鼠弱精子症的治疗作用  22-26
  2 弱精子模型中catsper 蛋白的表达变化  26-33
    2.1 弱精子模型中附睾组织中catsper 蛋白的变化  26-27
    2.2 单精子上catsper 蛋白的表达变化  27-30
    2.3 弱精子模型上catsper mRNA 表达的变化  30-33
讨论  33-41
  1 动物模型的选择  33-36
    1.1 钙离子通道在精子运动中的作用及其临床意义  34
    1.2 精子运动和精子活动力低下的概念  34
    1.3 Ca~(2+)相关通道的类型  34-36
  2 Ca~(2+)通道在精子运动中的作用  36-39
  3 生精散中药组方、组方配伍特点及疗效分析  39-41
    3.1 生精散的药物组成  39
    3.2 生精散的组方配伍特点  39
    3.3 生精散的疗效分析  39-41
结语  41-42
参考文献  42-46
综述  46-55
  参考文献  51-55
致谢  55-56
详细摘要  56-60

生精散治疗大鼠弱精子症的实验研究

内容摘要

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