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四株人胚胎干细胞系造血分化潜能的比较

作　者: 罗彬
导　师: 卢光琇
学　校: 中南大学
专　业: 干细胞工程学
关键词: 人类胚胎干细胞造血分化潜能拟胚体成血成血管细胞
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

人类胚胎干细胞（hESCs）是来源于着床前囊胚的内细胞团能在长期培养中无限增殖并保持未分化状态,且具有分化成人体组织各种细胞类型能力的细胞。hESCs能为细胞移植治疗提供细胞来源,也可作为研究个体发生发育的工具。近来有文献报道每株hESCs都有自己独特的转录模式,并且在增殖时间、转导效率、长期培养中的稳定性、自发分化模式及X失活状态等方面均可能存在很大差异。本研究中,我们通过流式检测、基因表达和集落培养等方法分别比较了在自发分化和造血诱导分化条件下我们实验室建立的四株hESCs系（chHES-8,XY,chHES-22,XY,chHES-32,孤雌,chHES-137,XX）向造血分化的能力,以筛选出具有较大造血分化潜能的hESCs,进行后续的造血分化研究。第一部分比较四株hESCs系造血分化潜能目的:比较在自发分化和诱导分化的条件下四株hESCs系（chHES-8,chHES-22,chHES-137,chHES-32）向造血分化的潜能。方法:1、EB自发分化12天,消化成单细胞悬液后,流式检测KDR、CD34和CD45阳性率;RT-PCR检测GATA-1、GATA-2、SCL和Runx1的表达水平;造血集落培养;2、EB诱导分化12天,消化成单细胞悬液后,流式检测glycophorin-A、CD34和CD45阳性率;RT-PCR检测GATA-1、GATA-2、SCL和Runx1的表达水平;3、将诱导分化12天的EBs,转至用Matrigel包被的12孔板贴壁培养7天,用胰酶消化后收集黏附和非黏附的细胞接种于MethoCult SF H4436半固体造血集落培养基中做造血集落培养。结果:chHES-22向造血分化的潜能最大。第二部分hESCs向成血成血管细胞诱导分化的初步研究目的:诱导chHES-22向成血成血管细胞分化方法:收集在Modified TeSR^TM1培养的未分化的hESCs克隆,在含50ng/mlBMP-4和50ng/ml VEGF的STEMPRO-34 SFM培养。3.5天时,消化EBs成单细胞悬液,接种在在含多种细胞因子的半固体培养基（BGM）中培养原始集落形成细胞。结果:chHES-22在BGM培养体系中可形成葡萄串样的原始细胞集落,每4×10⁴个EB来源的细胞可形成26个集落。总结:1、通过流式检测、基因表达和集落培养等方法比较了在自发分化和造血诱导分化条件下四株hESCs系向造血分化的潜能,筛选出具有较大造血分化潜能的胚胎干细胞系chHES-22;2、chHES-22可诱导分化形成葡萄串样的原始集落形成细胞。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-10
技术路线  10-11
前言  11-12
第一部分比较四株hESCs系造血分化潜能  12-34
  1.材料与试剂  12-14
  2.方法  14-18
  3.结果  18-20
  4.讨论  20-34
第二部分 hESCs向成血成血管细胞诱导分化的初步研究  34-42
  1.材料与试剂  34-36
  2.方法  36-37
  3.结果  37
  4.讨论  37-42
总结  42-43
参考文献  43-46
综述  46-53
致谢  53-54
在读硕士期间成果  54-55
个人简历  55

四株人胚胎干细胞系造血分化潜能的比较

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