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兔颈总动脉狭窄后脑缺血再灌损伤对VEGF及AKt表达的影响及意义

作　者: 张丽婷
导　师: 范学军
学　校: 中南大学
专　业: 神经病学
关键词: 颈总动脉狭窄 局灶性缺血再灌注 缺血耐受 凋亡 VEGF AKt
分类号: R543.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：本实验通过建立颈动脉狭窄模型,研究颈动脉狭窄后兔脑局灶性缺血再灌注损伤对血管内皮生长因子(VEGF)及丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶(AKt)表达的影响及意义。方法：应用70只新西兰兔随机分组：正常对照组(A组,n=5),假狭窄组(B组,n=5),狭窄组(C组,n=5)；狭窄+假缺血组(D组,n=5),缺血再灌注组(E组,n=25),狭窄+缺血再灌注组(F组,n=25),E、F组根据再灌注时间等分为5个小组,即再灌3小时、6小时、24小时、48小时及27小时组。C、D、F组行“针控线栓法”建立双侧颈总动脉中度狭窄,B组行假狭窄以及C、D、F组狭窄术后的实验动物恢复正常喂养15天,E、F组再予以右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)制作局灶性脑缺血再灌注模型。狭窄后动物进行血管超声检查证实血管狭窄程度。分别采用2%氯化三苯四唑(TTC)染色法观察梗死面积；行病理学检查；TUNEL原位杂交法观察脑缺血侧海马区细胞凋亡的情况,并计算阳性细胞数；应用免疫组织化学法检测脑缺血侧海马区VEGF及AKt表达情况,分别计算IA值,进行组间比较及相关性分析。结果：1.TUNEL检测：A、B、C、D组偶见凋亡细胞,E、F组凋亡细胞数量较A、B、C、D组增加(P<0.01),再灌注3小时后凋亡细胞数量升高,于6小时后达高峰,对应时间点F组凋亡细胞数量较E组少(P<0.01)。2：免疫组化结果：A、B组VEGF极少量表达,C、D组VEGF表达高于A、B组(P<0.01),C、D组高于A、B组AKt表达(P<0.01)；E、F组各时间点VEGF、AKt表达IA值有统计学差异(P<0.01),E、F组间IA值比较有统计学意义(P<0.01)。结论：1.双侧颈动脉中度狭窄可一定程度上减轻兔脑局灶性缺血再灌注损伤的程度。2.AKt参与缺血神经细胞内信号转导,并可能通过上调VEGF的表达,而起到增强缺血耐受的作用。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
英文缩写注释  10-11
第一章 前言  11-14
第二章 材料与方法  14-26
  2.1 材料  14-16
    2.1.1 实验动物  14
    2.1.2 主要试剂与药品  14-15
    2.1.3 主要仪器与设备  15-16
  2.2 方法  16-26
    2.2.1 动物模型制备  16-18
    2.2.2 动物一般行为及神经功能缺损体征评分  18
    2.2.3 相关试剂配制  18-20
    2.2.4 相关器皿的处理  20-21
    2.2.5 石蜡切片制作  21
    2.2.6 TTC染色  21
    2.2.7 HE染色  21-22
    2.2.8 尼氏体染色  22
    2.2.9 Tunel原位杂交  22-23
    2.2.10 VEGF、AKt的免疫组织化学染色(ABC法)  23-24
    2.2.11 图像处理及IA值  24
    2.2.12 统计学处理  24-26
第三章 结果  26-37
  3.1 颈动脉狭窄模型制备结果  26
    3.1.1 颈动脉狭窄模型手术结果  26
    3.1.2 颈总动脉内径测量结果  26
  3.2 缺血再灌注模型结果  26-27
  3.3 组织形态学变化  27-28
    3.3.1 缺血再灌注后病理学变化  27-28
    3.3.2 TTC染色  28
    3.3.3 TUNEL结果  28
  3.4 免疫组化结果  28-31
    3.4.1 VEGF的表达  28-29
    3.4.2 AKt的表达  29
    3.4.3 VEGF与AKt相关性分析  29-31
  3.5 附图  31-37
    3.5.1 统计图  31-32
    3.5.2 颈动脉造模图  32-33
    3.5.3 TTC染色  33-34
    3.5.4 TUNEL结果  34-35
    3.5.5 免疫组化VEGF结果  35-36
    3.5.6 免疫组化Akt结果  36-37
第四章 讨论  37-44
  4.1 兔颈动脉狭窄模型的评价  37-38
  4.2 缺血再灌注模型评价  38
  4.3 脑缺血再灌注后凋亡细胞的动态变化  38-39
  4.4 脑缺血再灌注VEGF的表达及意义  39-41
  4.5 脑缺血再灌注Akt的变化及意义  41-42
  4.6 VEGF与Akt在脑缺血中的作用  42-44
第五章 结论  44-45
参考文献  45-50
综述  50-59
  参考文献  55-59
致谢  59-60
攻读学位期间主要的研究成果  60

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 血管疾病 > 颈动、静脉疾病
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