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促红细胞生成素对大鼠胰腺腺泡细胞和肺组织的保护作用
作 者: 陈婧华
导 师: 陈垦
学 校: 广东药学院
专 业: 临床医学
关键词: 腺泡细胞 原代培养 鉴定 促红细胞生成素 急性胰腺炎 保护作用
分类号: R576
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
【目的】探索原代培养胰腺腺泡细胞方法并鉴定所培养细胞的性质,为急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)体外模型的构建创造条件,通过促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对胰腺腺泡细胞和肺组织保护作用的研究,为今后EPO治疗AP的临床应用提供理论依据。【方法】分离提纯胰腺腺泡细胞,将其置于DMEM-F12培养液中培养,24h后电子显微镜下观察胰腺腺泡细胞的超微结构变化,并运用PaA抗体鉴定培养细胞性质。90只Sprague-Dawley(SD)大鼠分为假手术组(sham-operation group, SO),SAP(Severeacute pancreatitis, SAP)组,EPO1000组,EPO3000组,EPO5000组,每组18只,分别按以下时间24h、48h、72h随机处死6只。逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠(sodiumtaurocholate, STC)(0.1ml/100g)制备SAP大鼠模型。测大鼠肺、胰腺干湿比重及体重系数,人工碘比色法测血清AMS,Elisa试剂盒测IL-1、IL-6和TNF-α,分析3种炎性因子的相互关系;HE染色观察胰腺和肺组织病理变化,免疫组化法检测胰腺组织中EPOR的表达,Elisa法检测EPOR表达水平。【结果】①新鲜分离的大鼠胰腺腺泡细胞悬浮在培养液中,形态不规则,细胞质与细胞核比例较大。分离纯化后腺泡细胞绝大多数呈圆形或椭圆形,细胞核呈圆形,偏于一侧,细胞间杂质较少。②24h后可见细胞数有所增加,细胞明显聚集,2~3天换液后观察细胞,细胞活性好,细胞数目明显增多,传代良好。③经台盼蓝染色测定细胞活性达96%以上,符合进一步实验要求。④电镜下,大量的酶原颗粒位于细胞顶部的胞质内,细胞内可见发达的粗面内质网,在酶原颗粒聚集的区域可见高尔基复合体。⑤经PaA抗体检测腺泡细胞在免疫荧光镜下呈现大片绿色荧光。⑥SAP组大鼠肺脏干湿比重大于SO组(P<0.05),经EPO治疗后,肺、胰腺水肿减轻;SAP组大鼠体重系数亦大于SO组和EPO组(P<0.05);⑦SAP组与EPO组血清AMS、IL-1、IL-6、TNF-α水平均明显高于SO组,经EPO治疗24h和48h后,测血清AMS明显降低(P<0.05),SAP组和EPO组各时间点的血清炎症因子(IL-1、IL-6、TNF-α)含量均高于SO组, SAP组升高显著,48h达到峰值,72h有所回落,经EPO治疗后各指标均有下降,EPO疗效呈时间依赖性,三者之间呈正相关性(r=0.534, p=0.02; r=0.584, p=0.04; r=0.820,p=0.00),有相互促进表达作用。⑧SO组胰腺和肺组织均无明显病理变化;SAP组大鼠胰腺和肺组织出现不同程度水肿、渗出、炎症细胞浸润,部分组织出现出血、坏死、空泡形成,细胞间结构模糊,甚至连接成片;EPO治疗组胰腺和肺组织病理损伤程度明显改善,病理评分显著低于SAP组(P<0.05)。组间比较显示:除EPO3000和EPO5000间无统计学意义外,其他各组间差异均有统计学意义。⑨EPO治疗组、假手术组大鼠胰腺和肺组织中,可见散在的EPOR阳性表达,染色位置位于胞浆;不同剂量EPO治疗组中EPOR在胰腺和肺组织中均呈现大片深染的阳性表达。⑩ELISA法测EPOR表达量示:假手术组、SAP组EPO1000组中EPOR表达量的变化不显著,差异无统计学意义,EPOR表达量随EPO剂量的增加而增加。【结论】①本实验方法可成功原代培养胰腺腺泡细胞,培养细胞纯度及存活率高,符合体外实验要求;②PaA抗体可成为鉴定胰腺腺泡细胞的一种便捷、可行的方法,其特异性高,可推广应用于鉴定胰腺腺泡细胞;③SAP组大鼠血清中炎症介质IL-1、IL-6、TNF-α水平呈逐渐升高趋势;EPO可有效减轻胰腺和肺组织病理损伤,降低SAP大鼠血清AMS、IL-1、IL-6、TNF-α水平;④ELISA法及免疫组化法检测出胰腺腺泡细胞上EPOR的表达,其表达量随EPO剂量的增加而增加,但与治疗时间无明显相关性,由此推测EPO可与EPOR结合后,激活下游的细胞信号转导通路,从而起到抗炎的作用。
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全文目录
中文摘要 5-7 Abstract 7-10 1 前言 10-15 1.1 研究背景 10-14 1.2 研究目的 14 1.3 研究内容 14-15 2 大鼠胰腺胰腺腺泡细胞的原代培养和鉴定 15-25 2.1 材料与方法 15-20 2.2 结果 20-23 2.3 讨论 23-25 3 促红细胞生成素对胰腺腺泡细胞和肺组织的保护作用 25-47 3.1 材料与方法 25-31 3.2 结果 31-45 3.3 讨论 45-47 4 结论 47-48 参考文献 48-54 附论文说明:英文缩略词 54-56 致谢 56-57 附 文献综述 57-69 参考文献 64-69 附录Ⅱ 已经发表的综述和待发表论著 69
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 胰腺疾病
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