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硒和VitC对高氟所致氧化应激、DNA损伤及Bcl-2蛋白表达影响研究
作 者: 王桂芹
导 师: 赵新华
学 校: 广东药学院
专 业: 流行病学与卫生统计学
关键词: 硒 维生素C 氟 氧化应激 DNA损伤 Bcl-2
分类号: R599
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
目的地方性氟中毒是世界上广泛分布的一种地方病,我国是该病流行最严重的国家之一。硒和维生素C联用对氟致毒性影响的研究至今还未见报道。本研究从硒和维生素C单独作用的基础上进行研究,通过探讨不同剂量硒和维生素C对高氟所致氧化应激、DNA损伤及Bcl-2蛋白表达影响,为下一步硒和维生素C联用对氟致毒性的研究提供依据。方法将健康大鼠随机分成空白对照组、高氟组、低硒组、中硒组、高硒组、低维生素C组、中维生素C组及高维生素C组。除空白对照组饮用自来水并灌胃蒸馏水外,其他组大鼠均饮用150mg/ml氟化钠(NaF)溶液并灌胃相应剂量的亚硒酸钠溶液(低硒组:4ug/ml亚硒酸钠溶液;中硒组:8ug/ml亚硒酸钠溶液;高硒组:16ug/ml亚硒酸钠溶液。)或维生素C溶液(低维生素C组:0.01g/ml维生素C溶液;中维生素C组:0.02g/ml维生素C溶液;高维生素C组:0.04g/ml维生素C溶液)。给药体积均为5ml/kg体重,每天1次,给药时间共一个月。给药一个月后处死大鼠,采集标本进行如下处理:1.采用离子电极选择法测定大鼠尿中氟离子浓度;测定肝、肾脏器系数;2.测定大鼠肝脏和肾脏氧化应激相关指标:采用硫代巴比妥酸(TBA)显色法测定丙二醛(MDA)含量;采用二硫双硝基苯甲酸(DTNB)法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性。3.采用单细胞凝胶电泳方法测定大鼠肝脏和肾脏细胞DNA损伤率。4.采用免疫组化方法观察肝、肾组织的Bcl-2蛋白表达水平。结果1.尿氟和脏器系数检测结果显示:饮用氟化钠溶液后各组尿氟浓度均升高,其中空白对照组和高氟组差异有统计学意义(P<0.05),提示饮用氟化钠溶液促进了尿氟的排泄。中硒组、低维生素C组和中维生素C组与空白对照组间差异有统计学意义(P<0.05),而与高氟组间差异无统计学意义(P>0.05),提示中剂量的硒和低中剂量的维生素C均不能改善因饮用氟化钠导致的尿氟浓度的升高,低硒组和高氟组差异有统计学意义(P<0.05),而与空白对照组无统计学意义(P<0.05)。各组间脏器系数差异无统计学意义(P>0.05)。2.肝肾组织氧化应激相关指标测定结果显示:与空白对照组和高氟组相比,各硒组和各维生素C组肝GSH-Px均有所升高,且有统计学意义(P<0.05)。肝MDA各组间差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组组和高氟组相比,低硒组肝SOD显著升高且有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组相比,高氟组肾GSH-Px显著升高并有统计学意义(P<0.05)。低维生素C组和高氟组间差异有统计学意义(P<0.05)。低硒组和中硒组与空白对照组间肾MDA差异有统计学意义(P<0.05),高硒组和低维生素C组与高氟组间差异有统计学意义(P<0.05)。3.DNA损伤测定结果显示:肝组织高氟组与空白对照组相比细胞损伤率升高且差异有统计学意义(P<0.05)。低硒组、高硒组与高氟组的损伤率差异有统计学意义(P<0.05)。中硒组与空白对照组的损伤率差异有统计学意义,与高氟组无显著差异(P<0.05)。高维生素C组、中维生素C组与高氟组的DNA损伤率无显著性差异(P>0.05)。肾组织空白对照组与高氟组损伤率无显著性差异(P>0.05)。硒各剂量组的损伤率与高氟组的损伤率无显著差异(P>0.05)。维生素C各剂量组和高氟组细胞损伤率差异有统计学意义(P<0.05)。4.Bcl-2蛋白表达测定结果显示:各组间肝肾组织Bcl-2蛋白表达不明显,平均光密度值差异无统计学意义(P>0.05)。高氟组和空白对照组相比平均光密度值有所下降但无统计学意义。对于肝组织,随着硒和维生素C的剂量的增加,平均光密度值逐渐增加,但差异尚无统计学意义(P>0.05)。结论1.大鼠摄入高剂量氟后,尿氟浓度显著升高,说明染氟实验成功。低剂量的硒可以改善因饮用氟化钠导致的尿氟浓度的升高,对氟导致的肾损害具有保护作用。2.大鼠摄入高剂量氟后,肝组织脂质过氧化作用不明显,表明肝脏对氟所致过氧化作用有一定的代偿能力。3.大鼠摄入高剂量氟后,肝细胞发生了显著DNA损伤。低剂量和高剂量的硒对氟致肝脏细胞的DNA损伤起到了拮抗作用。各剂量组维生素C与氟化钠联用时产生了肾细胞毒性,其实验结果的产生机制有待进一步研究。推测可能与实验剂量和试验时间等有关。4.大鼠摄入高剂量氟后,肝肾Bcl-2蛋白表达虽有所降低但差异尚无统计学意义,提示该实验条件下氟化钠尚未对肝肾Bcl-2蛋白表达产生抑制作用。
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 地方病学
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