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N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶试剂盒制备及其临床应用研究

作　者: 徐秀芬
导　师: 李红
学　校: 浙江大学
专　业: 糖尿病及其并发症
关键词: N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶试剂盒糖尿病肾病
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

1 NAG试剂盒制备目的：制备符合临床检测要求的NAG测定液体试剂盒。方法：采用VRA-NAG为底物,选择合适的缓冲液体系、底物浓度及表面活性剂,制备NAG测定液体试剂盒,并对其线性、精密度、准确度、稳定性和抗干扰性等性能进行评价。结果：NAG活性在100 mmol/L柠檬酸缓冲液pH 5.8时最大,pH在5.0-6.6之间相差不大,考虑到底物稳定性,选用缓冲液pH 5.0作为NAG测定最佳值。根据米氏方程测得Km值为0.32 mmol/L,因此,将NAG测定的底物浓度定为Km值的10倍量3.2 mmol/L作为NAG测定试剂的最佳底物浓度。底物溶液中添加0.1%的Tween20和0.1%的BSA,有助于底物溶解及稳定。NAG活性在0-360 U/L范围内线性良好。批内CV低值标本为1.74%,高值标本为0.86%；批间CV低值标本为3.21%,中值标本为1.65%,高值标本为1.08%。平均回收率为103.7%。试剂开瓶7天和保存一年,稳定性均较好。维生素C浓度在50 mg/L以下对本法测定结果基本无干扰,高浓度将产生负干扰,使测定结果偏低。乳酸<0.9 g/L、丙酮酸<20 mg/L、酒石酸<17 mg/L、尿酸<0.13 g/L、葡萄糖<9 g/L、胆红素<4.6 mg/L时,对本法测定结果无显著影响。结论：本研究研制的NAG测定试剂盒可灵敏、准确、快速地对人尿液中的NAG活性进行测定,试剂盒经线性、精密度、准确度、稳定性和抗干扰性的相关比较检测,结果符合临床检测要求。2 NAG试剂盒在糖尿病肾病诊断中的临床应用目的：探讨尿NAG对糖尿病早期肾损害的诊断价值。方法：检测糖尿病无肾病组、糖尿病合并肾病组及正常对照组尿NAG活性。结果：糖尿病无肾病组NAG值为20.5±16.6 U/L,糖尿病有肾病组NAG值为40.6±13.4 U/L,均较对照组7.2±2.8 U/L明显升高(P<0.05),糖尿病有肾病组较糖尿病无肾病组尿NAG值明显升高(P<0.05)。结论：尿NAG检测对糖尿病肾损害的早期诊断具有一定的价值。总结：1.本研究研制的NAG测定试剂盒可灵敏、准确、快速地对人尿液中的NAG活性进行测定。2.本研究制备的NAG测定试剂盒,经线性、精密度、准确度、稳定性和抗干扰性的相关比较检测,结果符合临床检测要求。3.经临床初步检测证明NAG测定试剂盒可灵敏、准确地对人尿液NAG活性进行测定,尿NAG检测对糖尿病肾损害的早期诊断具有一定的价值。

全文目录

致谢  4-5
前言  5-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-11
缩略词表  11-12
目次  12-14
1 NAG试剂盒制备  14-35
  1.1 仪器与试剂  15
  1.2 实验方法  15-20
    1.2.1 测定原理及单位定义  15-16
    1.2.2 吸收波长考察  16
    1.2.3 试剂各成份和浓度对检测性能的影响  16-18
    1.2.4 方法学评价  18-20
    1.2.5 数据分析  20
  1.3 实验结果  20-35
    1.3.1 吸收波长  20
    1.3.2 最适缓冲液浓度与pH  20-21
    1.3.3 底物浓度选择  21-22
    1.3.4 试剂中其他成分的选择  22-23
    1.3.5 线性范围  23-25
    1.3.6 精密度试验  25-27
    1.3.7 回收率试验  27
    1.3.8 对比试验  27-29
    1.3.9 试剂稳定性观察  29-30
    1.3.10 干扰试验  30-35
2 NAG测定在糖尿病肾病诊断中的临床应用  35-37
  2.1 仪器与试剂  35
  2.2 实验对象  35-36
  2.3 实验方法  36
  2.4 数据分析  36
  2.5 实验结果  36-37
讨论  37-39
全文总结  39-40
参考文献  40-42
综述  42-53
  参考文献  49-53
作者简历  53

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