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促红细胞生成素联合骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤的实验研究

作　者: 谢中
导　师: 康意军
学　校: 中南大学
专　业: 脊柱外科
关键词: 促红细胞生成素间质干细胞脊髓损伤移植 BBB评分神经功能恢复
分类号: R651.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的研究骨髓间充质干细胞与促红细胞生成素联合应用对大鼠脊髓损伤修复的影响方法将80只SD大鼠随机分成手术对照组(简称对照组,n=15)、促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)治疗组(简称EPO组,n=15)、大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗组(简称BMSCs组,n=25)和BMSCs联合EPO治疗组(简称联合组,n=25)。造模后第7天EPO组经腹腔注射促红细胞生成素,而BMSCs组、联合组则经损伤脊髓局部注射BMSCs和局部注射BMSCs的同时加用EPO腹腔注射。移植后第3d、1w、3w,BMSCs组、联合组两组分别应用双标免疫荧光法检测5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记BMSCs的神经元中丝蛋白(NF-M)的表达情况,移植后第3周各组取脊髓组织作HE病理切片染色,再用免疫组化观察神经元中丝蛋白(NF-M)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,每个时间点取5只大鼠,移植后第1d、1w、2w、3w和4w,各组选10只大鼠分别用(BassoBeattie Bresnahan, BBB)法检测大鼠神经功能的恢复情况。所得数据采用组间均数比较t检验进行统计学处理。结果1、脊髓病理切片显示联合组较BMSCs组胶质细胞增生更加活跃,炎性细胞浸润和组织水肿显著减轻。2、双标免疫荧光结果显示移植的BMSCs在宿主脊髓中存活,从第7天开始就有NF-M表达。免疫组化结果显示联合组中NF-M和GFAP阳性细胞数目均比其余组多(P<0.05)。3、治疗组脊髓损伤修复较对照组明显,神经功能BBB评分也明显提高(P<0.05)。4、联合组在不同的时间点神经功能BBB评分都较EPO组、BMSCs组高。结论1、BMSCs移植与EPO腹腔注射是治疗大鼠脊髓损伤的有效方法；2、促红细胞生成素在体内有诱导BMSCs向神经细胞分化的能力。3. BMSCs与EPO联合应用对脊髓损伤修复具有协同作用。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
第一章前言  11-13
第二章材料与方法  13-20
  2.1 动物及药物  13
  2.2 主要试剂  13
  2.3 主要设备  13-14
  2.4 实验步骤  14-19
  2.5 统计学处理  19-20
第三章结果  20-24
  3.1 大鼠脊髓损伤行为学检测(BBB评分)  20-21
  3.2 脊髓组织HE染色检查结果  21-22
  3.3 Brdu与NF-M双标荧光染色结果  22
  3.4 NF-M与GFAP免疫组化结果  22-24
第四章讨论  24-31
  4.1 BMSCs的移植时间  24
  4.2 脊髓损伤模型的选择  24-25
  4.3 BMSCs与EPO修复脊髓损伤的作用机制  25-26
  4.4 BBB行为学评分  26-27
  4.5 双标免疫荧光及免疫组化评价  27-31
第五章结论  31-32
附图  32-37
参考文献  37-42
综述  42-58
  参考文献  52-58
致谢  58

促红细胞生成素联合骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤的实验研究

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