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周期性压力培养对兔骨髓间充质干细胞增殖及基质金属蛋白酶-2的影响

作　者: 李正章
导　师: 程应樟
学　校: 南昌大学
专　业: 内科学
关键词: 骨髓间充质干细胞增殖压力培养细胞周期基质金属蛋白酶-2
分类号: R329.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的研究周期性压力培养对兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)增殖活性及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2, MMP-2)的影响,探索影响BMSCs增殖的最佳力学参数,达到大量扩增的目的。方法密度梯度离心法分离培养新西兰大白兔BMSCs,取生长良好的第3代细胞,按4×104个/孔接种于6孔板,设立5组:5.32 kPa, 10.64 kPa, 21.28 kPa, 29.26 kPa (1 kPa=7.5 mmHg)压力组、对照组(正常大气压培养)。分别给予对应的压力培养,每日加压6 h×3 d;正常培养组细胞只接受正常大气压刺激,不予额外加压。通过四甲基偶氮唑(MTT)比色试验,流式细胞仪(flow cytometer, FCM)鉴定细胞表面抗原阳性表达及检测细胞增殖周期,同时收集培养液作MMP-2质量浓度检测。观察不同周期性压力对BMSCs增殖及MMP-2的影响。结果6 h/d压力干预BMSCs,3 d后细胞形态无异常变化,呈集落样生长。随着压力的增加,细胞吸光度值逐渐升高,以21.28 kPa压力组最高,但升高至29.26 kPa压力时吸光度值明显降低(F=3.731, P=0.008)。与正常培养组比较,5.32, 10.64, 21.28 kPa压力组细胞周期发生改变,增殖指数(proliferation index, PI)均明显升高(P < 0.05或0.01),但29.26 kPa压力组PI则明显下降。细胞培养上清液MMP-2质量浓度以21.28 kPa压力组最低,29.26 kPa压力组最高,组间比较差异有显著性意义(t=213.214,P < 0.001)。结论5.32～21.28 kPa的周期性压力可以提高BMSCs的增殖能力,特别是21.28 kPa压力刺激促增殖作用尤为明显,并降低培养液中的MMP-2的浓度。但压力过高则抑制细胞增殖,培养液中的MMP-2的浓度升高,导致细胞死亡增多。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-8
第1章引言  8-13
  1.1 概述  8
  1.2 BMSCs 的生物学特性  8-9
  1.3 BMSCs 分离方法  9
  1.4 BMSCs 的鉴定  9
  1.5 BMSCs 移植的临床应用  9-10
  1.6 细胞压力培养的现状  10
  1.7 MTT 检测法及流式细胞术  10-11
  1.8 MMP-2 及 ELISA 检测  11-12
  1.9 实验设计及研究方法  12-13
第2章材料和方法  13-18
  2.1 实验仪器及材料  13-14
    2.1.1 实验仪器  13
    2.1.2 实验材料  13
    2.1.3 部分试剂配制  13-14
  2.2 实验方法  14
    2.2.1 设计  14
    2.2.2 方法  14
  2.3 BMSCs 的分离培养  14-15
  2.4 实验分组  15
  2.5 BMSCs 加压培养方法  15-16
  2.6 BMSCs 计数与台盼蓝检测  16
  2.7 BMSCs 增殖的MTT 检测  16
  2.8 流式细胞仪检测  16-17
  2.9 BMSCs 培养上清液 MMP-2 质量浓度检测  17
  2.10 统计学分析  17-18
第3章结果  18-22
  3.1 BMSCs 的生长情况  18-19
  3.2 BMSCs 增殖 MTT 检测结果  19
  3.3 BMSCs表面抗原的表达及细胞周期检测  19-21
  3.4 BMSCs 培养上清液 MMP-2 质量浓度检测结果  21-22
第4章讨论  22-25
  4.1 BMSCs 生物学及分离鉴定方法  22-23
  4.2 BMSCs 的力学研究  23
  4.3 各种实验方法及实验结果解释  23-25
第5章结论与展望  25-26
  5.1 结论  25
  5.2 进一步工作的方向  25-26
致谢  26-27
参考文献  27-30
综述  30-40
附录  40-41
攻读学位期间的研究成果  41

周期性压力培养对兔骨髓间充质干细胞增殖及基质金属蛋白酶-2的影响

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