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违禁药物残留微阵列检测试剂盒的开发

作　者: 章寅
导　师: 叶邦策
学　校: 华东理工大学
专　业: 食品科学
关键词: 药物残留试剂盒酶联免疫抗原氯霉素盐酸克伦特罗链霉素
分类号: S859.84
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

违禁药物残留是指给畜禽等动物使用法律严格规定禁止或者限制使用的药物后,在动物细胞、组织和器官内以及可食性产品中蓄积或贮存的药物或化学物的原形、代谢产物和杂质。动物源性食品中违禁药物残留超标会对人体健康产生直接或者间接的危害。本论文利用荧光免疫小分子微阵列技术,建立了动物源性食品中违禁药物残留的快速检测方法,研制开发了氯霉素(CAP)、盐酸克伦特罗(CLB)和链霉素(STR)多组份快速检测试剂盒。首先分别采用碳二亚胺法合成氯霉素全抗原,重氮法合成盐酸克伦特罗全抗原,高碘酸钠氧化法合成链霉素全抗原,上述方法有效提高了小分子药物与载体蛋白的偶联率,将小分子药物与载体蛋白的偶联物通过点样仪点制在多孔糖介质包被的玻片上制备微阵列,在微阵列表面通过荧光竞争免疫反应检测食品样本中的违禁药物残留。基于上述方法,我们还研究开发了针对氯霉素、盐酸克伦特罗及链霉素的微阵列检测试剂盒。通过测试和验证,该试剂盒相关参数如下：批内变异系数小于11%,批间变异系数小于20%；回收率范围大于40%；氯霉素、盐酸克伦特罗和链霉素的检测限分别为0.055μg/L,0.017 gg/L和0.082μg/L,实验数据符合美国食品药品监督管理局及我国农业部对药物的分析规定,符合相应检测标准的要求,可用于快速定性定量检测分析。试剂盒测试结果与传统酶联免疫吸附试验及标准仪器测试方法所得结果具有较好的符合率。试剂盒的技术参数满足农业部2005年发布的《药物残留酶联免疫试剂(盒)备案审查技术资料要求》和《药物残留酶联免疫试剂(盒)备案参考评判标准》技术参数要求。本课题研究开发的动物源性食品中违禁药物残留微阵列检测试剂盒为动物源性食品中安全卫生检测提供了快捷有效的检测手段,适合各级检验检测机构及相关企业自查应用,也为食品中其它残留物质的检测分析提供了新的思路。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-10
第1章文献综述  10-24
  1.1 药物残留的危害  10-11
    1.1.1 毒性反应  10-11
    1.1.2 诱导耐药菌株  11
    1.1.3 造成三致作用  11
  1.2 药物残留检测方法  11-17
    1.2.1 仪器方法  11-12
    1.2.2 微生物法  12
    1.2.3 免疫测试法  12
    1.2.4 检测分析系统研究进展  12-17
  1.3 检测方法研究进展  17-20
    1.3.1 盐酸克伦特罗(CLB)残留的分析方法  18-19
    1.3.2 氯霉素(CAP)残留的分析方法  19-20
    1.3.3 链霉素(STR)残留的分析方法  20
  1.4 生产检测试剂盒公司  20-24
    1.4.1 RIDASCREEN(?)兽残试剂盒  21
    1.4.2 SNAP快速检测仪  21-23
    1.4.3 CMT抗生素残留检测试剂盒  23-24
第2章小分子药物全抗原合成新方法  24-50
  2.1 前言  24
  2.2 材料和方法  24-26
    2.2.1 试剂  24-26
    2.2.2 仪器  26
  2.3 实验方案  26-40
    2.3.1 小分子全抗原合成  26-37
    2.3.2 小分子全抗原的鉴定  37-38
    2.3.3 全抗原的偶联比测定  38-40
  2.4 实验结果  40-50
    2.4.1 合成抗原鉴定  40-44
    2.4.2 全抗原蛋白浓度的测定  44-46
    2.4.3 偶联率的测定  46-50
第3章药物残留检测试剂盒开发  50-57
  3.1 实验方案  50-51
    3.1.1 探针浓度优化  50
    3.1.2 一抗浓度选择  50-51
    3.1.3 多元检测体系优化  51
  3.2 结果和讨论  51-57
    3.2.1 探针浓度优化  51-54
    3.2.2 一抗浓度优化  54-57
第4章试剂盒的开发技术参数  57-63
  4.1 标准曲线  57
  4.2 检测限、定量限和临界值  57-58
  4.3 精密度和准确度  58-61
    4.3.1 精密度  58-59
    4.3.2 准确度  59-61
  4.4 交叉反应  61
  4.5 开发试剂盒的实际应用  61-63
第5章试剂盒备案审查技术资料要求  63-68
  5.1 产品研制概况  63-64
    5.1.1 材料制备方法  63
    5.1.2 检测方法的建立  63-64
  5.2 样品提取方法的研究情况  64-65
    5.2.1 猪肉、猪肝样品处理  64-65
    5.2.2 牛奶样品处理  65
    5.2.3 蜂蜜样品处理  65
  5.3 与理化方法的比较  65-68
    5.3.1 与代表性进口试剂盒的比较  65-66
    5.3.2 与HPLC-MS仪器测定值比较  66-68
第6章结论与展望  68-70
  6.1 结论  68
    6.1.1 抗原合成部分  68
    6.1.2 试剂盒开发部分  68
  6.2 展望  68-70
参考文献  70-75
附录1  75-76
致谢  76

违禁药物残留微阵列检测试剂盒的开发

内容摘要

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