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NDRG2在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖的影响

作　者: 朱财林
导　师: 王岭；李南林
学　校: 第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: NDRG2 乳腺癌 G1期阻滞基因转染
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

人NDRG2基因（N-myc downstream regulated gene 2）是1999年从正常成人全脑文库中最先发现并克隆得到。其定位于14q11.2,含有16个外显子,15个内含子,mRNA全长为2,024 bp,编码含有357个氨基酸残基,蛋白质分子量约40KD。NDRG基因家族中最先被发现的是NDRG1,是在研究N-myc下游调节基因时从小鼠胚胎中发现的。现已发现的人NDRG基因家族成员有4个:NDRG1, NDRG2, NDRG3和NDRG4,它们之间具有较高的同源性,但其表达水平在组织发育阶段和分布上存在明显差异。目前对NDRG基因家族功能了解主要来源于NDRG1的研究,已发现上调NDRG1的因素有:同型半胱氨酸、细胞氧化应激反应(缺氧,Ni²⁺,各种还原剂)、视黄酸、p53等。综合已有文献,推测NDRG基因家族可能参与细胞生长分化,维持细胞氧化还原电势平衡,阻止肿瘤细胞恶化等。前期研究工作表明,NDRG2基因在多种组织中均有表达,而以中枢神经系统的大脑皮质、白质、神经核,唾液腺上皮细胞和骨骼肌细胞中表达最高,在多种肿瘤组织或细胞系如结肠癌、胶质瘤、白血病、淋巴瘤和腮腺癌中无表达或低表达,因此推测NDRG2基因可能是一新的抑癌基因,故研究NDRG2基因功能及其调节具有重要的理论意义及临床应用价值,而目前尚未见NDRG2基因与乳腺癌发生发展的详细报道。本研究旨在探讨NDRG2基因在乳腺癌发病机制中的作用,确定其功能,为乳腺癌的防治提供理论依据。本研究的主要发现如下:1、通过免疫组织化学、real time PCR、蛋白印迹等方法检测了NDRG2在80例临床新鲜乳腺癌组织标本（包括浸润性导管癌54例、小叶癌18例、小叶原位癌8例）及相应癌旁组织标本中的表达水平。结果显示:NDRG2 mRNA在63例患者肿瘤组织中表达水平较相应癌旁组织低,且该表达与其病理分级呈正相关;仅有5例患者的乳腺肿瘤组织中NDRG2的mRNA表达水平高于相对应的自身肿瘤瘤旁组织;另外有12例患者两者NDRG2 mRNA的表达无差异。该结果提示NDRG2基因的表达量与细胞的增殖能力成反比。表达量高的,增殖能力弱,随着表达量的降低,增殖能力增加。2、采用脂质体转染法将NDRG2基因转入乳腺癌细胞系SK-BR-3,经G418筛选后获得稳定高表达NDRG2的亚克隆细胞系SK-BR-3-NDRG2及仅转染载体的SK-BR-3/pcDNA3.1（+）。为下一步体外、体内实验奠定了基础。利用包装和鉴定好的重组NDRG2腺病毒转染低表达NDRG2的人乳腺癌细胞系Bcap37,提高该细胞中NDRG2的表达水平,观察NDRG2表达对Bcap37细胞生长的影响。3、应用平板克隆形成试验、MTT、流式细胞仪检测转染前后细胞增殖能力的差异。NDRG2的高表达导致了乳腺癌细胞系增殖能力减弱;细胞周期阻滞在G0 /G1期。综上所述,抑癌候选基因NDRG2在乳腺癌组织中随着肿瘤恶性程度的增加而表达降低;在NDRG2稳定转染的SK-BR-3细胞和Bcap37细胞中,过表达NDRG2可有效抑制细胞增殖并导致细胞周期的阻滞。该研究结果为进一步阐述NDRG2的功能奠定了基础,为进一步揭示乳腺癌的发病机制及开展基因治疗,提供了理论依据。

全文目录

缩略语表  5-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-12
前言  12-13
文献回顾  13-31
正文  31-58
  实验一 NDRG2 基因在乳腺癌组织中的表达  31-43
    引言  31
    1 材料  31-32
    2 方法  32-38
    3 结果  38-41
    4 讨论  41-43
  实验二 NDRG2 稳转乳腺癌细胞系的建立及鉴定  43-51
    1 材料  43-44
    2 方法  44-46
    3 结果  46-50
    4 讨论  50-51
  实验三 NDRG2 基因对乳腺癌细胞系SK-BR-3 和Bcap37 细胞功能的影响  51-58
    1 材料  51
    2 方法  51-53
    3 结果  53-56
    4 讨论  56-58
小结  58-59
参考文献  59-71
个人简历和研究成果  71-72
致谢  72

NDRG2在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖的影响

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