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油莎豆再生体系的建立及多倍体诱导

作　者: 吴琼
导　师: 郑国锠；刘恒
学　校: 兰州大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 油莎豆愈伤组织诱导多倍体诱导气孔
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 90次
引　用: 3次
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内容摘要

本研究主要对油莎豆茎尖培养、愈伤组织的诱导与植株再生、组织培养中的褐化问题、无菌苗的移栽和栽培管理、秋水仙素诱导产生多倍体等方面进行了探讨,建立了油莎豆离体培养体系,包括油莎豆的消毒、无菌苗的获得、外植体的选择、最优培养基与培养方式的选择、无根苗的生根与移栽、无菌苗的栽培管理以及油莎豆愈伤组织诱导和形态学观察、秋水仙素诱导的最适条件、多倍体的鉴定等;主要研究结果如下:1.油莎豆再生体系的建立以无菌培养的茎段、叶片、根做为外植体,通过不同激素配比,不同培养方式的比较,来筛选茎尖诱导、生根培养、愈伤组织诱导的最佳培养基;选取不同外植体,来探寻诱导愈伤组织的最佳材料;通过添加不同褐变抑制剂、选用不同培养方式,来降低抑制油莎豆组织培养中的褐变发生率。试验结果表明:外植体用70%的酒精浸泡1min,再用10%NaCIO浸泡40min,或用70%的酒精浸泡1min,再用0.2%升汞浸泡40min,最后无菌水冲洗5次以上,所获得的消毒效果最好;茎尖诱导最优培养基为MS+6BA0.5mg/L+TDZ0.5mg/L+ZT0.5mg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂(PH 5.8);愈伤组织诱导最佳培养基MS+2,4-D3.0mg/L+KT1.0mg/L+6BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+600-800mg/LCH 3%蔗糖+0.7%琼脂(PH 5.8);只有切取的茎段基部能诱导出愈伤组织。油莎豆抑制褐变的有效方法是在培养墓中添加高浓度2,4-D和4g/LPVP,并且黑暗条件下培养两周;最佳生根培养基是1/2MS+IBA0.2mg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂(PH 5.8),组培苗在转入生根培养基十天后,生根率可达100%;将培养瓶中的小苗炼苗2天后,移入花盆中,存活率可达85%。2.油莎豆块茎采收后即使在适宜条件下也不能正常萌发,在4℃下贮藏1-2周后,方可萌发。因为油莎豆在冬季存在休眠现象,不同温度的交替贮藏,在一定范围内可以促进块茎休眠的解除。3.秋水仙素是人工诱导多倍体的主要化学物质,用于处理的植物材料和处理方法很多,其中以成熟种子为材料进行染色体加倍是最为常用的方法。近年来,随着植物组织培养技术的发展和完善,利用离体组织染色体加倍法进行多倍体诱导已在许多植物中取得成果。而要利用组织培养对离体组织进行染色体加倍,首先要建立高效的组织培养再生体系。油莎豆多倍体的诱导以0.2%的秋水仙素水溶液浸泡处理油莎豆茎尖48h能获得理想的存活率和诱导率,诱导率达43.7%,存活率为44.4%。对油莎豆二倍体和多倍体的气孔进行了观察比较发现多倍体与二倍体相比,气孔长度减少了5.83%,宽度减少了12.7%,但是气孔密度却增加了24.1%,气孔保卫细胞内叶绿体数目增加了63%。气孔大小及密度也可以作为鉴定多倍体的可靠间接指标。

全文目录

中文摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
第一章前言  11-32
  1.油莎豆概述  11-20
    1.1 油莎豆的生物学特征  11
    1.2 油莎豆的应用价值  11-16
    1.3 植物组织培养研究进展  16
    1.4 植物组织培养的研究意义  16-17
    1.5 油莎豆组织培养的意义和研究进展  17-18
    1.6 问题和展望  18-20
  2.植物多倍体的研究  20-22
    2.1 多倍体育种的意义  20-21
    2.2 多倍体的鉴定  21-22
  3.植物多倍体的应用  22-24
    3.1 多倍体在遗传学与生理学中的应用  23
    3.2 多倍体在农业生产中的应用  23-24
  4.生物能源概述  24-30
    4.1 生物能源简介  24-26
    4.2 国内外生物柴油的研究现状  26-28
    4.3 我国开发能源植物的优势及发展策略  28-30
  5.本实验研究的目的和意义  30-32
第二章油莎豆再生体系的建立和形态发生  32-46
  1.材料和方法  32-34
    1.1 材料来源  32
    1.2 方法  32-34
  2.结果与分析  34-41
    2.1 适宜消毒方式的选择  34-35
    2.2 愈伤组织的诱导与分化  35-38
    2.3 生根与移栽  38-39
    2.4 褐化问题  39-40
    2.5 分化苗的快速繁殖  40
    2.6 形态学发生  40-41
  3.讨论  41-46
    3.1 快速繁殖途径的选择  41-42
    3.2 外植体的选择  42
    3.3 激素种类的选择  42-44
    3.4 抑制褐化  44
    3.5 组织学研究  44-46
第三章秋水仙素诱导油莎豆染色体加倍的研究  46-56
  1.材料和方法  46-47
    1.1 无菌材料的获得  46
    1.2 诱变处理  46
    1.3 生根培养  46
    1.4 炼苗及移栽(同第二章)  46
    1.5 气孔保卫细胞叶绿体数观察  46-47
    1.6 根尖染色体数目鉴定  47
  2.结果和讨论  47-51
    2.1 油莎豆无菌苗的获得(同第二章)  47
    2.2 不同浓度秋水仙素处理不同时间对油莎豆茎尖成活率与诱导率的影响  47-48
    2.3 多倍体植株的生根与移栽(同第二章)  48
    2.4 四倍体的鉴定  48-51
  3.讨论  51-55
    3.1 关于诱导材料选择  51-52
    3.2 嵌合体现象  52
    3.3 秋水仙素的浓度和处理时间对外植体的影响  52-53
    3.4 秋水仙素的生物毒性  53-54
    3.5 多倍体鉴定的方法问题  54-55
  4.小结  55-56
致谢  56-57
参考文献  57-63
在学期间的研究成果  63-64
ABBREVIATIONS  64

油莎豆再生体系的建立及多倍体诱导

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