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JBP485抗大鼠小肠损伤的机制及其与寡肽转运体PEPT1表达和功能变化的关系

作　者: 王威
导　师: 刘克辛
学　校: 大连医科大学
专　业: 药理学
关键词: JBP485 PEPT1 二肽吲哚美辛表达
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:非甾体类抗炎药( non-steroidal antiinflammatory drugs,NSAIDs)如吲哚美辛、阿司匹林等,临床使用常引起胃肠道损害等副作用。PEPT1是位于小肠刷状缘膜的寡肽转运体,介导蛋白消化产物及类肽药物的摄取和转运。营养不良及代谢失调均可引起PEPT1基因和蛋白表达发生变化,一些临床常见病如溃疡性结肠炎等也可诱导肠道PEPT1的表达和功能发生改变。JBP485 (cyclo-trans-4-L-hydroxyprolyl-L-serine;环状-反式-4-左旋-羟脯氨酸-左旋丝氨酸)是一种二肽(dipeptide),从日本抗肝炎药物Laennec(人胎盘水解物)中分离,具有一定的抗炎活性。本课题旨在研究JBP485对吲哚美辛诱导的肠损伤是否有保护作用以及是否会影响PEPT1表达和功能发生相应变化。方法:动物实验:按不同给药方式将大鼠分为正常对照组、模型组、JBP485治疗组和JBP485对照组。吲哚美辛给药24小时后,分别记录各组大鼠腹泻情况;将大鼠用乙醚麻醉后取空肠肠段观察溃疡情况;通过病理切片观察肠黏膜的组织形态学变化;分别测定肠黏膜中的髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量;各组大鼠在吲哚美辛灌胃给药24小时后,分别进行体内口服吸收、离体翻转肠和原位单向空肠灌流实验;分别提取各组大鼠肠黏膜的总RNA和蛋白,进行RT-PCR和Western blot实验测定各组大鼠PEPT1的mRNA和蛋白表达情况。细胞实验:将于24孔板培养14天的Caco-2细胞按不同给药方式同样分为正常对照组、模型组、JBP485治疗组和JBP485对照组。分别测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率和丙二醛(MDA)含量,并且观察细胞形态学的改变。采用RT-PCR及Western blot实验测定各组细胞中PEPT1的mRNA和蛋白表达情况。结果:1.与正常对照组相比,模型组:(1)大鼠腹泻及溃疡情况显著增多。光镜下组织形态学和病理学观察可见大鼠小肠组织出现溃疡,溃疡中央肠黏膜坏死脱落,绒毛结构消失,黏膜下层充血、出血,淋巴细胞浸润。肌层充血,未见坏死。形成单层结构的Caco-2细胞出现空洞,与细胞培养孔广泛的分离,游离细胞增多。(2)大鼠小肠MPO、MDA水平显著升高(p<0.01),Caco-2细胞的LDH释放率及MDA含量显著增加(p<0.05,p<0.01),表明吲哚美辛能够导致小肠发生脂质过氧化损伤,同时伴随炎性细胞浸润。(3)大鼠体内口服、离体翻转肠、在体肠灌流实验表明大鼠小肠对Gly-Sar的摄取能力均显著下降,AUC显著降低(p<0.05,p<0.01, p<0.05),结果提示吲哚美辛诱导大鼠肠损伤后小肠黏膜上的PEPT1摄取功能下降。(4)RT-PCR与Western blot结果一致,大鼠小肠PEPT1和Caco-2细胞中PEPT1表达均下降。结果表明,吲哚美辛诱发小肠损伤后肠黏膜上的PEPT1表达下降。2.与模型组相比,JBP485治疗组:(1)大鼠腹泻及发生溃疡例数显著减少。光镜下组织形态学和病理学观察可见大鼠小肠组织病理改变明显减轻,绒毛结构缺失显著减少,黏膜下层充血得到缓解,淋巴细胞浸润不明显。Caco-2细胞破损显著改善,细胞单层结构较完整。(2)JBP485能够抑制小肠发生脂质过氧化损伤,减少炎性细胞浸润,表现为大鼠小肠MPO、MDA水平显著降低(p<0.05),Caco-2细胞的LDH及MDA水平显著下降(p<0.05)。(3)JBP485给药后增强了吲哚美辛诱导大鼠肠损伤黏膜上PEPT1的摄取功能,表现为在大鼠体内口服、离体翻转肠、在体肠灌流实验中大鼠小肠对Gly-Sar的摄取能力均增强,AUC显著增大(p <0.05,p<0.01,p<0.05)。(4)RT-PCR与Western blot结果趋势相同,JBP485抑制了吲哚美辛诱导肠损伤黏膜上PEPT1的表达下降,使大鼠小肠PEPT1和Caco-2细胞中PEPT1表达显著上调。3.与正常对照组相比,JBP485对照组各项实验结果无显著性差异,病理学及形态学无明显改变。结论:1.体内体外实验均表明,JBP485对吲哚美辛诱导的小肠损伤有明显的保护作用。2.JBP485对吲哚美辛诱导的小肠PEPT1 mRNA表达和PEPT1蛋白含量的向下调节有明显的抑制作用。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
材料和方法  12-24
结果  24-33
讨论  33-36
结论  36-37
参考文献  37-40
综述  40-49
  参考文献  46-49
附录缩略语表  49-50
本研究的论文发表、获奖和参加学会情况  50-51
致谢  51

JBP485抗大鼠小肠损伤的机制及其与寡肽转运体PEPT1表达和功能变化的关系

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