学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

天花粉蛋白抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长及逆转syk基因甲基化的研究

作　者: 华芳
导　师: 单保恩；艾军
学　校: 河北医科大学
专　业: 免疫学
关键词: 乳腺癌天花粉蛋白 syk MSP DNA甲基转移酶活性
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 81次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的:本研究从细胞分子水平研究中药天花粉蛋白(TCS)的抗肿瘤和逆转syk基因甲基化的作用及其作用机制,寻找新的抗肿瘤和去甲基化药物。方法:1.采用MTT法分析不同浓度TCS作用不同时间后,人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖反应的变化;2 .采用Giemsa染色技术观察TCS作用前后MDA-MB-231细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳分析TCS(20μg/ml)处理48h后MDA-MB-231细胞的DNA梯度降解(DNA Ladder)变化,分析TCS对细胞凋亡的影响;3.采用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测不同浓度TCS作用48h后,MDA-MB-231细胞凋亡和细胞周期分布情况;4.采用甲基化特异性PCR ( MSP )技术检测MDA-MB-231细胞经20μg/mlTCS作用48h前后syk基因甲基化状况的改变;5. RT-PCR方法分析MDA-MB-231细胞经20μg/mlTCS作用48h前后syk、DNA甲基转移酶Dnmts、去甲基转移酶MBD2 mRNA表达量的变化;6.使用DNA甲基转移酶活性检测试剂检测MDA-MB-231细胞经20μg/ml TCS作用48h前后DNA甲基转移酶活性变化状况。结果:1.中药天花粉蛋白(TCS)体外对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖反应具有显著抑制作用(p<0.05),并呈时间和浓度依赖性,药物浓度越大、作用时间越长,抑制效应越强。10、20、40、80、100μg/ml的TCS分别处理MDA-MB-231细胞24、48、72h后,抑制率最高可达77.74±0.539%。2.TCS作用于MDA-MB-231细胞后,可诱导典型的细胞凋亡形态变化,如细胞体缩小,胞质浓缩,空泡样变性,有的细胞出现核固缩,核碎裂等典型的细胞凋亡形态特征;经20μg/mlTCS作用48h后,MDA-MB-231细胞DNA出现明显的梯度图象(DNA Ladder),提示细胞发生凋亡;3.流式细胞分析结果显示,TCS能使MDA-MB-231细胞发生凋亡和生长周期阻滞,凋亡率随着时间和浓度的增加而增加,细胞生长周期阻滞在S期;4. MSP法分析MDA-MB-231细胞经TCS作用前,syk基因启动子区甲基化,经20μg/mlTCS作用48h后,MDA-MB-231细胞syk基因启动子区甲基化状况逆转;RT-PCR法分析结果显示MDA- MB-231 syk mRNA表达阴性,经20μg/mlTCS作用48h后,syk mRNA表达阳性;MDA-MB-231细胞经20μg/mlTCS作用48h前后甲基转移酶Dnmts、去甲基转移酶MBD2 mRNA表达量没有明显变化(p>0.5);5. MDA-MB-231细胞经20μg/mlTCS作用48h后,DNA甲基转移酶Dnmts活性降低(p<0.5)。结论:1.中药天花粉蛋白(TCS)体外能明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖。2.TCS对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的抑制作用可能与其诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞有关,TCS能使MDA-MB-231的生长周期阻滞在S期。3. TCS能逆转乳腺癌细胞株MDA-MB-231 syk基因启动子区甲基化状况。4. TCS可能是通过降低DNA甲基转移酶Dnmts的活性发挥其去甲基化作用的。

全文目录

中文摘要  4-7
英文摘要  7-10
英文缩写  10-11
研究论文天花粉蛋白抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231 生长及逆转syk 基因甲基化的研究  11-44
  前言  11-12
  材料与方法  12-25
  结果  25-28
  附图  28-35
  附表  35-37
  讨论  37-41
  结论  41
  参考文献  41-44
综述 DNA 甲基化检测方法的研究及进展  44-71
致谢  71-72
个人简历  72

天花粉蛋白抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长及逆转syk基因甲基化的研究

内容摘要

全文目录

相似论文