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突变亨廷顿蛋白表达对CRE介导的基因转录的影响

作 者: 陈鑫
导 师: 秦正红;林芳
学 校: 苏州大学
专 业: 药理学
关键词: 亨廷顿舞蹈病 CRE 基因转录
分类号: R742.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
下 载: 31次
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内容摘要


目的:研究亨廷顿蛋白(Hungting, Htt)氨基末端片段-- Htt-552片段和Htt-171片段对CRE介导的基因转录的影响,评估该基因转录调节通路在亨廷顿舞蹈病致病机制中的作用。方法:采用脂质体转染的方法将pGL4[luc2P/CRE/Hygro]荧光素酶基因报告质粒转染到PC12细胞中,经过潮霉素筛选后得到稳定表达该质粒的PC12细胞(简称为PC12-CRE)。用腺病毒介导野生型与突变型Htt-552片段和Htt-171片段感染的方法制作亨廷顿舞蹈病的PC12-CRE细胞模型。利用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测其荧光值,观察突变型Htt-552片段和Htt-171片段在正常情况下以及细胞应激情况下对CRE介导的基因转录的影响。用Real-time PCR的方法检测Htt-552片段和Htt-171片段对BDNF mRNA表达的影响。结果:稳定表达pGL4[luc2P/CRE/Hygro]质粒的PC12细胞构建成功。腺病毒成功介导野生型与突变型Htt-552片段和Htt-171片段在PC12-CRE细胞中表达。免疫组织化学结果显示Htt-552片段在细胞内主要分布于细胞浆,细胞核内表达较少,无聚集体形成,而Htt-171片段尤其是突变型在胞浆中有大量聚集体产生,胞核中表达较少,无聚集体。免疫组化结果显示Htt-552片段和Htt-171片段在核内与CBP仅存在微弱的共定位。荧光素值结果显示突变型Htt-552片段和Htt-171片段对cAMP反应元件调节的转录无影响。即使在环境应激情况下,包括添加3-硝基丙酸(3-NP)、海人藻酸(KA)、多巴胺(Dopamine)、金属离子(CuSO4、FeSO4.7H2O)和NH4Cl,突变型Htt-552片段和Htt-171片段对cAMP反应元件相关性转录也无影响。野生型Htt-552片段和Htt-171片段上调BDNF mRNA的表达,而突变型下调其表达。结论:突变型Htt-552片段和Htt-171片段无论是在正常情况或某些细胞应激情况下对cAMP反应元件相关性转录均无影响。突变型Htt-552片段和Htt-171片段降低了BDNF的表达。

全文目录


中文摘要  3-4
Abstract  4-8
前言  8-13
  一、亨廷顿舞蹈病中的致病假说  8-11
  二、论文设计思路  11-13
第一部分 稳定表达pGL4[luc2P/CRE/Hygro]质粒的PC12 细胞的构建  13-17
  引言  13-14
  材料与方法  14-15
  结果  15-16
  小结  16-17
第二部分 Htt N 端片段对CRE 介导的基因转录的影响  17-36
  引言  17
  第一节 Htt-552 片段和Htt-171 片段在PC12-CRE 细胞中的表达  17-25
    材料与方法  17-21
    结果  21-24
    小结  24-25
  第二节 Htt-N 端片段表达与CBP 之间的关系  25-26
    材料与方法  25
    结果  25-26
    小结  26
  第三节 Htt N 端片段对CRE 介导的基因转录的影响  26-29
    材料与方法  26-27
    结果  27-28
    小结  28-29
  第四节 应激情况下Htt N 端片段对CRE 介导的基因转录的影响  29-36
    材料与方法  29-30
    结果  30-35
    小结  35-36
第三部分 突变亨廷顿蛋白表达对BDNF 的影响  36-40
  引言  36
  材料与方法  36-38
  结果  38-39
  小结  39-40
讨论  40-45
  一. 亨廷顿舞蹈病细胞模型的建立  40-42
  二. 前人所做的与基因转录相关的研究  42-44
  三. 总结  44-45
结论  45-46
参考文献  46-50
攻读硕士学位期间发表文章  50-51
本课题得到资金资助  51-52
综述  52-62
英文缩写词表  62-63
致谢  63

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑部疾病 > 舞蹈病
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