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靶向整合素β1（ITGB-1）的RNAi对胰腺癌细胞株PANC-1生物学特性的影响

作　者: 王兢
导　师: 李德春
学　校: 苏州大学
专　业: 普通外科学
关键词: 胰腺癌 整合素β1 细胞外基质 PANC-1 RNA干扰 小干扰RNA 5-氟尿嘧啶 药物敏感性
分类号: R735.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的检测胰腺癌组织中整合素β1(ITGB1)的表达,并分析其临床意义。转染靶向ITGB1基因的小干扰RNA片段,并研究其对胰腺癌低分化细胞株PANC-1的ITGB1表达的抑制作用及对该细胞侵袭能力、增殖活性、凋亡率、药物敏感性等特性的影响。为进一步研究胰腺癌的侵袭转移、耐药及治疗等在一定程度上奠定基础。方法①免疫组织化学方法检测28例胰腺癌组织及14例正常胰腺组织标本中ITGB1蛋白的表达,比较其差异,分析ITGB1的表达量与胰腺癌分化程度、组织类型、淋巴转移情况的关系。②设计制备多对针对ITGB1基因的小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA),通过阳离子脂质体Lipofectamine2000转染胰腺癌低分化细胞株PANC-1,流式细胞仪检测转染效率,采用实时定量PCR(RQ-PCR)法测定转染后PANC-1细胞ITGB1及内参ab1的mRNA表达、测算干扰效率、检测干扰效果维持时间、筛选出最有效siRNA,Western Blot法测定转染后PANC-1细胞ITGB1蛋白的表达。③对于转染后PANC-1细胞,用Transwell小室试验检测其侵袭能力、MTT法检测其增殖活性、AnnexinV/PI双染法检测其在有与无5-Fu作用下的早期凋亡率、MTT法检测在梯度浓度的5-Fu作用下的细胞存活率。结果①胰腺癌组织中整合素β1表达明显较正常胰腺组织高,有淋巴结转移的胰腺癌组织整合素β1表达显著升高,分期较高的胰腺癌组织整合素β1表达亦显著升高。②细胞数约为每孔2.0×10~5个、siRNA浓度约为50nmol/L时,有较佳的转染效率,继续提高siRNA浓度并不能明显提高转染效率;siRNA3导致的ITGB1mRNA表达降低最为显著,干扰效率最高;转染效果能够至少维持至转染后的96h;转染了siRNA3后48h的PANC-1细胞ITGB1蛋白的表达量有所减少。③转染了siRNA3的PANC-1细胞,在体外的侵袭能力明显减弱,增殖活性及细胞凋亡率无明显影响;但在5-Fu作用下,其细胞凋亡率明显大于同样浓度5-Fu作用下的未转染PANC-1细胞,细胞存活率也明显减少,IC50显著减少。结论胰腺癌组织中整合素β1较正常胰腺组织高表达,有淋巴结转移及分期较高的胰腺癌组织的整合素β1也显著升高。RNAi可以有效抑制PANC-1细胞ITGB1的表达。靶向干扰ITGB1的表达对PANC-1细胞的增殖活性和细胞凋亡率无明显影响,但可以减弱其体外侵袭能力,还可以增加其对5-Fu的药物敏感性。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-8
前言  8-10
第一部分 整合素β1(ITG81)在胰腺癌组织中的表达及其临床意义  10-16
  材料和方法  10-11
  结果  11-13
  讨论  13-16
第二部分 RNAi 对胰腺癌细胞株PANC-1 整合素β1(ITG81)表达的抑制作用  16-29
  材料与方法  16-21
  结果  21-25
  讨论  25-29
第三部分 靶向阻断整合素β1 表达的RNAi 对胰腺癌细胞株PANC-1 生物学活性的影响  29-40
  材料与方法  29-32
  结果  32-37
  讨论  37-40
结论  40-41
参考文献  41-48
综述  48-61
缩略词表  61-62
攻读学位期间公开发表的论文  62-63
致谢  63

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胰腺肿瘤
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