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农杆菌介导的高羊茅转化WAX2基因研究

作　者: 胡晓敏
导　师: 饶力群
学　校: 湖南农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 高羊茅 再生体系 WAX2基因 农杆菌介导转化
分类号: S688.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 25次
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内容摘要


高羊茅（Festuca arundinacea Schreb.）是广泛种植的冷季型优良草坪草种,具有耐践踏、耐贫瘠、抗寒、抗病等优点,是我国目前使用量增长最快的草种。但高羊茅的夏季生长需水量较大,而草坪灌溉的大量需水则是制约我国草坪业发展的主要问题之一。因此,提高抗旱能力是高羊茅育种工作的重要任务。本试验以高羊茅的胚性愈伤组织为受体,通过农杆菌介导的遗传转化体系将禾本科植物水稻（Oryza sativa）来源的WAX2同源基因OsWAX2-1（AK070469）转移到高羊茅中,经PCR分子检测和序列测定,证实了外源基因已经整合到植株DNA中。本文所获得的主要结果如下:1.建立了高羊茅高效离体再生体系以70%酒精5min+5.25%次氯酸钠15min或者70%酒精5min+洁尔灭1min处理高羊茅成熟种子,具有最佳消毒效果。高羊茅愈伤组织诱导培养基:MS+0.5g·L-1水解酪蛋白+5mg·L-1 2,4-D+0.02mg·L-1 KT,出愈率达到86.1%。高羊茅愈伤组织分化培养基:MS+0.5·L-1水解酪蛋白+0.6mg·L-1 TDZ+0.5mg·L-1 NAA,愈伤组织分化率达到91.9%。2.建立了高羊茅遗传转化体系最优化参数为:预培养3d,农杆菌工程菌液OD600=0.8,农杆菌工程菌液pH值5.2,浸染时间30min,100μmol·L-1乙酰丁香酮,共培养时间3d,潮霉素延迟筛选10d。3.获得了高羊茅转WAX2基因植株对潮霉素筛选出的转化植株进行PCR检测,阳性率为8.8%。对PCR产物进行序列测定,证明本实验成功将WAX2同源基因OsWAX2-1转入高羊茅基因组中。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
第一章 绪论  9-21
  1 高羊茅遗传育种研究进展  9-17
    1.1 高羊茅育种概况  10
      1.1.1 国外高羊茅育种概况  10
      1.1.2 国内高羊茅育种现状  10
    1.2 高羊茅育种方法  10-17
      1.2.1 高羊茅的常规育种方法  10-11
      1.2.2 DNA分子标记辅助育种技术  11
      1.2.3 高羊茅再生体系与遗传转化的研究进展  11-16
      1.2.4 农杆菌介导的高羊茅遗传转化影响因素  16-17
  2 WAX2及其同源基因简介  17-19
    2.1 WAX2基因简介  17-19
  3 本研究的目的和意义  19-21
第二章 高羊茅再生体系的优化  21-32
  1 实验材料与方法  21-23
    1.1 材料  21-22
      1.1.1 供试材料  21
      1.1.2 主要化学试剂与仪器设备  21
      1.1.3 培养基及主要试剂配制方法  21-22
    1.2 实验方法  22
      1.2.1 外植体消毒  22
      1.2.2 愈伤组织诱导  22
      1.2.3 愈伤组织继代与分化  22
      1.2.4 生根培养  22
      1.2.5 炼苗与移栽  22
    1.3 数据统计与分析  22-23
  2 结果与分析  23-29
    2.1 外植体的消毒  23-24
    2.2 不同激素配比对愈伤组织诱导的影响  24-26
      2.2.1 2,4-D与KT的浓度组合对愈伤组织诱导的影响  24-25
      2.2.2 2,4-D与ABA的浓度组合对愈伤组织诱导的影响  25-26
    2.3 激素对胚性愈伤组织分化的影响  26-28
    2.4 再生苗的生根  28-29
  3 讨论  29-30
    3.1 高羊茅成熟种子的消毒  29
    3.2 植物生长调节剂对高羊茅愈伤组织诱导、分化的影响  29-30
  4 小结  30-31
  5 附图  31-32
第三章 农杆菌介导高羊茅转化WAX2基因研究  32-43
  1 材料与方法  32-36
    1.1 材料  32-34
      1.1.1 植物材料  32
      1.1.2 农杆菌菌株与质粒  32
      1.1.3 主要试剂  32-33
      1.1.4 培养基  33-34
    1.2 实验方法  34-36
      1.2.1 农杆菌工程菌液的制备  34
      1.2.2 农杆菌介导转化高羊茅  34
      1.2.3 抗性愈伤组织的筛选和植株再生  34-35
      1.2.4 高羊茅转基因植株的分子检测  35-36
    1.3 数据统计  36
  2 结果与分析  36-40
    2.1 转化植株的获得  36-37
    2.2 多因素对高羊茅遗传转化效率的影响  37-39
      2.2.1 预培养时间对转化率的影响  37
      2.2.2 工程菌液浓度及浸染时间对转化率的影响  37
      2.2.3 共培养时间对转化率的影响  37-38
      2.2.4 延迟筛选对转化率的影响  38-39
    2.3 转基因植株的PCR检测  39-40
  3 讨论  40-41
    3.1 关于影响农杆菌介导高羊茅愈伤组织遗传转化的因素探讨  40-41
      3.1.1 农杆菌侵染过程中各种因素的影响  40-41
      3.1.2 筛选方式的影响  41
  4 小结  41-42
  5 附图  42-43
参考文献  43-49
附录1  49-50
附录2  50-51
致谢  51-52
作者简介  52
在读期间发表论文  52

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 观赏园艺（花卉和观赏树木） > 园林植物栽培及应用技术 > 草坪与地被植物
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