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裸燕麦球蛋白及其酶解物的制备和抗氧化活性研究

作　者: 蔺瑞
导　师: 张美莉
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 粮食、油脂及植物蛋白工程
关键词: 裸燕麦 球蛋白 纯化 酶解物 抗氧化 功能特性
分类号: S512.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


以裸燕麦为原料,采用Osborne蛋白分级方法分离提取裸燕麦球蛋白,并利用盐析、Sephadex G-100凝胶过滤层析、SDS-PAGE电泳等方法对其纯化。研究结果表明:裸燕麦球蛋白提取的最佳条件为:NaCl浓度10%,料液比1:10,提取时间35min,提取5次,提取率可达90%以上。裸燕麦球蛋白的硫酸铵饱和度为60%。在柱层析分离条件下(洗脱速度为3～7mL/10min,缓冲溶液为蒸馏水),得到的组分I分子量范围分布在25kDa、34～29kDa、44kDa,组分II分子量范围分布在19kDa、23kDa、25kDa。采用蛋白酶水解裸燕麦球蛋白,筛选最佳水解蛋白酶,获得最佳酶解工艺,并利用Sephadex G-25凝胶层析进行纯化及其分子量测定。结果表明:采用碱性蛋白酶水解,酶用量10000U/g,底物浓度5%,温度60℃,pH值9.0,水解3h后水解度达75%以上,清除率达60%以上。酶解液经分离纯化得到图谱为2个峰,分别为组分I (分子量范围:10738Da～133929Da)和组分I(I分子量范围:114Da～861Da)。分别对裸燕麦球蛋白、酶解物、分离组分I、分离组分II清除·OH、O2ˉ·、DPPH·能力进行研究,并对球蛋白及其酶解物的溶解性、乳化性、粘度、起泡性等功能特性进行测定。研究结果表明:测得组分II清除·OH ( IC500.589mg/mL )、O2ˉ·(IC501.783mg/mL)、DPPH·(IC500.095mg/mL)能力高于其他三个组分。pH值在3.0～9.0时酶解物溶解性较球蛋白显著提高,达93%以上;当pH7.0时裸燕麦球蛋白的乳化性及乳化稳定性最小,为18.1㎡/g和13.0㎡/g,当pH5.0时酶解物的乳化性及乳化稳定性最小,为55.2㎡/g和32.8㎡/g,显示了酶解物较高的乳化性能力;裸燕麦球蛋白及其酶解物浓度在1.5%～10%时,粘度变化较为平缓,但当浓度高于10%时,粘度上升较快。其中球蛋白粘度较酶解物的高;在pH5.0时球蛋白及其酶解物的起泡性最低,其中酶解物显示了较高的起泡性。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-8
插图和附表清单  8-10
1 引言  10-14
  1.1 燕麦蛋白质的研究概况  10-11
    1.1.1 燕麦蛋白质的营养价值  10-11
    1.1.2 燕麦蛋白质的制备方法  11
  1.2 生物活性肽的研究概况  11-13
    1.2.1 生物活性肽的概述  11
    1.2.2 生物活性肽的制备方法  11-12
    1.2.3 抗氧化活性肽的研究进展  12-13
  1.3 选题的目的和意义  13-14
  1.4 研究的主要内容及路线  14
    1.4.1 研究的主要内容  14
2 材料与方法  14-26
  2.1 材料  14-15
    2.1.1 试验材料  14-15
    2.1.2 药品试剂  15
    2.1.3 主要仪器  15
  2.2 试验方法  15-26
    2.2.1 Osborne法提取裸燕麦球蛋白  15-17
    2.2.2 裸燕麦球蛋白的制备和盐析  17
    2.2.3 裸燕麦球蛋白纯化条件的选择  17-18
    2.2.4 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定分子量  18-19
    2.2.5 裸燕麦球蛋白的酶解工艺  19-20
    2.2.6 凝胶过滤层析纯化酶解液及分子量范围的测定  20
    2.2.7 试验测定指标  20-24
    2.2.8 裸燕麦球蛋白及其酶解物抗氧化性的研究  24-25
    2.2.9 裸燕麦球蛋白及其酶解物的功能特性研究  25-26
3 结果与分析  26-43
  3.1 裸燕麦蛋白的组成分布  26
  3.2 Osborne法提取裸燕麦球蛋白  26-29
    3.2.1 温度对裸燕麦球蛋白提取率的影响  26-27
    3.2.2 单因素提取条件对裸燕麦球蛋白提取率的影响  27-28
    3.2.3 正交试验设计优化球蛋白提取条件  28-29
  3.3 裸燕麦球蛋白的硫酸铵盐析  29-30
  3.4 裸燕麦球蛋白纯化条件的选择及SDS-PAGE电泳分析  30-32
    3.4.1 洗脱速度的选择  30
    3.4.2 缓冲液的选择  30-31
    3.4.3 裸燕麦球蛋白SDS-PAGE电泳分析  31-32
  3.5 裸燕麦球蛋白的酶解工艺  32-35
    3.5.1 裸燕麦球蛋白最适水解酶的筛选  32
    3.5.2 单因素酶解条件对水解度及羟自由基抑制作用的影响  32-34
    3.5.3 正交试验设计优化球蛋白酶解条件  34-35
  3.6 Sephadex G-25凝胶柱纯化酶解液及其分子量测定  35-36
    3.6.1 酶解物放置时间的测定  35-36
    3.6.2 酶解物各组分分子量范围的测定  36
  3.7 裸燕麦球蛋白及其酶解物抗氧化能力测定  36-40
    3.7.1 球蛋白的抗氧化能力  36-37
    3.7.2 酶解物抗氧化活性的测定  37-38
    3.7.3 组分I抗氧化活性的测定  38-39
    3.7.4 组分II抗氧化活性的测定  39
    3.7.5 酶解液、分离组分I、组分II抗氧化活性比较  39-40
  3.8 裸燕麦球蛋白及其酶解物的功能特性测定  40-43
    3.8.1 裸燕麦球蛋白及其酶解物的溶解性  40-41
    3.8.2 裸燕麦球蛋白及其酶解物的乳化性  41
    3.8.3 裸燕麦球蛋白及其酶解物的粘度  41-42
    3.8.4 裸燕麦球蛋白及其酶解物的起泡性  42-43
4 讨论  43-44
5 结论  44-45
致谢  45-46
参考文献  46-50
作者简介  50

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 禾谷类作物 > 麦 > 燕麦
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