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OGD致星形胶质细胞胀亡钠钾ATP酶活性变化及药物干预

作　者: 卢艺
导　师: 褚晓凡
学　校: 暨南大学
专　业: 神经病学
关键词: 胀亡星形胶质细胞缺糖缺氧模型钠钾ATP酶流式细胞仪
分类号: R743
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景及目的：星形胶质细胞作为中枢神经系统的主要组成成分之一,其死亡方式也逐渐受到研究者的重视。本课题组前期研究观察到在脑组织中无论是缺血中心区还是缺血边缘区星形胶质细胞主要沿着胀亡的途径走向死亡。Majno(1995)等对细胞死亡方式进行了全面的回顾性研究,提出将胀亡作为一种细胞死亡的途径,认为细胞的死亡方式包括凋亡、胀亡、自噬性细胞死亡等模式。胀亡的机制目前尚不明确,可能是由于细胞膜的损伤、线粒体损伤、能量代谢障碍、蛋白酶表达、离子泵功能障碍等。本实验通过建立体外培养原代星形胶质细胞OGD(oxygen glucose deprivation缺糖缺氧)模型,探讨星形胶质细胞在缺糖缺氧后细胞膜损伤中的Na+.K+-ATP酶功能变化过程与胀亡的关系。硫酸镁已被证明对Na+,K+-ATP酶有兴奋作用,ouabain则有抑制作用。分别用这两种药物预处理,测定Na+,K+-ATP酶活性和胀亡细胞比率,以了解药物是否通过改变Na+,K+-ATP酶活性对星形胶质细胞胀亡有保护作用,希望能对临床缺血缺氧脑保护治疗提供帮助。方法：取新生24小时内的SD大鼠海马星形胶质细胞进行体外培养,培养18-21天后用GFAP染色鉴定其纯度,用电镜证实胀亡的存在和形态学变化。将细胞分成OGD空白对照组、硫酸镁组、ouabain组。进行OGD(0、1、2、3、4、6h)处理后检测不同OGD时间点的钠钾ATP酶的活性。用Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit,通过流式细胞仪检测不同时间点的胀亡、凋亡、活细胞的比率结果：钠钾ATP酶活性随OGD时间的延长而下降(P<0.05),空白对照组与硫酸镁预处理组、呱巴因预处理组之间则没有统计学差异(P>0.05)。胀亡细胞比率随OGD时间延长而增多。但胀亡细胞比率在对照组、硫酸镁组、呱巴因组之间无统计学差异(P>0.05)。凋亡比率则在OGD1-2小时后逐渐下降,OGD3小时后胀亡细胞比率(9.54±1.47%)可超过凋亡细胞比率(7.69±0.80%)(P<0.05)结论：钠钾ATP酶活性随OGD时间的延长而下降,胀亡比率随OGD时间的延长而升高。OGD3小时后胀亡细胞比率超过凋亡细胞比率。钠钾ATP酶的兴奋剂硫酸镁和抑制剂呱巴因均未能影响OGD后钠钾ATP酶的活性,从而也未能影响星形胶质细胞的死亡途径。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-9
1 前言  9-13
2 实验材料与方法  13-24
  2.1 动物来源  13
  2.2 实验耗材及仪器  13-14
  2.3 实验试剂  14-15
  2.4 技术路线  15-16
  2.5 星形胶质细胞原代培养  16-17
  2.6 GFAP染色鉴定星形胶质细胞原理及方法  17-19
  2.7 缺糖缺氧(OGD)模型建立  19
  2.8 星形胶质细胞钠钾ATP酶活性检测  19-20
  2.9 BCA蛋白浓度测定  20-21
  2.10 流式细胞仪细胞胀亡、凋亡检测  21-23
  2.11 电子显微镜观察细胞形态  23-24
3 实验结果  24-34
  3.1 GFAP荧光染色鉴定星形胶质细胞纯度超过95%  24-25
  3.2 OGD星形胶质细胞的超微结构改变  25-26
  3.3 OGD星形胶质细胞的钠钾ATP酶活性测定  26-29
  3.4 流式细胞仪测定结果  29-30
  3.5 流式细胞仪测细胞比率结果  30-34
4 讨论  34-40
5 结论  40-41
参考文献  41-45
附表中英文缩略词汇表  45-46
致谢  46-47
攻读硕士期间发表论文情况  47

OGD致星形胶质细胞胀亡钠钾ATP酶活性变化及药物干预

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