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结核杆菌ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组DNA疫苗免疫效果及其保护作用的研究

作　者: 蒋青桃
导　师: 王迎伟
学　校: 南京医科大学
专　业: 免疫学
关键词: 结核杆菌 ESAT-6 FL DNA疫苗 prime-boost
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

结核病是一种严重危害人类健康的重要传染性疾病,近年来结核病在世界范围内重新流行。根据WHO最新报告,目前全球超过1/3的人口感染结核杆菌(约20亿),在HIV感染患者中发病率则更高。我国是全球22个结核高负担国家之一,也是耐药结核菌疫情最严重的国家之一,疫情形势严峻,防治任务艰巨。卡介苗( Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guérin, BCG )是当今唯一的预防结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis, M. tb )感染的疫苗,它对婴幼儿有较好的保护作用,但对成年人却效果不佳,其保护效率仅在0%-80%之间。因此,发展新型抗结核病疫苗已成为医学界亟待解决的一项重要课题。本实验室前期已成功构建了结核杆菌6kD早期分泌蛋白(early secreted antigenic target, ESAT-6)抗原Th1型优势表位与fms-like tyrosine kinase 3 ligand(FL)重组的DNA疫苗,本课题旨在对该疫苗的免疫效果和保护效率进行鉴定与评判,因此,实验主要围绕以下两方面进行。第一部分结核杆菌ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组DNA疫苗prime-boost策略免疫效果的鉴定目的:研究结核杆菌ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组质粒(pIRES-TH-FL)对小鼠免疫功能的影响。方法:将质粒pIRES-TH-FL采用prime-boost策略免疫小鼠,检查小鼠体内特异性淋巴细胞增殖;脾细胞培养上清和肺泡灌洗液中Th1与Th2型细胞因子(IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10)的分泌;小鼠血清ESAT-6特异性IgG型抗体的水平;IFN-γ+T细胞的频率,以及体内CTL的杀伤功能。结果:联合ESAT-6蛋白的Th1型表位与FL的DNA疫苗能诱导偏向Th1型的免疫应答,prime-boost免疫方案可诱导出更优于BCG的免疫效果。结论:结核杆菌ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组DNA疫苗能够明显上调小鼠体内的细胞免疫应答水平。第二部分结核杆菌ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组DNA疫苗prime-boost策略保护作用的评价目的:研究结核杆菌ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组质粒(pIRES-TH-FL)对小鼠抵抗结核杆菌的保护作用。方法:将质粒pIRES-TH-FL免疫C57BL/6小鼠后,再用结核杆菌标准株H37Rv对其进行攻击,从菌落计数和病理损害方面评价疫苗的保护作用。结果:结核杆菌ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组DNA疫苗免疫小鼠后,小鼠肺和脾中的荷菌量显著减少;HE染色和免疫组化结果显示,其炎症浸润程度明显减轻。Prime-boost组与单独的DNA疫苗免疫组相比,保护效果更为明显。结论:用ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组DNA疫苗免疫小鼠能够抵抗结核杆菌的攻击,提供有效的保护作用,而prime-boost策略则能进一步增强这种保护效果。

全文目录

英文缩略词表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
研究背景  12-19
第一部分结核杆菌 ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组 DNA 疫苗 prime-boost 策略免疫效果的鉴定  19-48
  材料与方法  19-28
  结果  28-41
  讨论  41-46
  参考文献  46-48
第二部分结核杆菌ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组 DNA 疫苗 prime-boost 策略保护作用的评价  48-67
  材料与方法  48-54
  结果  54-61
  讨论  61-64
  参考文献  64-67
结论  67-69
附录一  69-84
  参考文献  76-84
附录二  84-85
致谢  85

结核杆菌ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组DNA疫苗免疫效果及其保护作用的研究

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