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自吞噬对脓毒症乳鼠心肌细胞活性及线粒体膜电位的影响

作　者: 齐莹莹
导　师: 姚尚龙；余永华
学　校: 华中科技大学
专　业: 麻醉学
关键词: 自吞噬 3-甲基腺嘌呤脓毒症心肌细胞线粒体膜电位
分类号: R459.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:观察自吞噬在LPS致脓毒症心肌抑制中的作用,并探讨其对心肌细胞活性和线粒体功能的影响。方法:以体外培养的1-3天的乳鼠原代心肌细胞作为研究对象,单用脂多糖(LPS)刺激或预加自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)(10mM)干预后再予以LPS刺激。实验随机分为四组:(1)阴性对照组:常规心肌细胞培养,不予任何处理;(2)LPS组:给予LPS,按检测要求调整培养时间;(3)3MA+LPS组:预先给予10mM3MA作用48h后,加入LPS,按检测要求调整培养时间;(4)3MA组:只给予10mM3MA48h的预处理,不做其他处理。利用Western Blot检测自噬体膜标志性蛋白质LC3-II/LC3-I比值的变化以评价自噬形成,用MTT法检测细胞活力,流式细胞术测定线粒体膜电位(MMP)。结果:与对照组相比,LPS作用呈剂量依赖性抑制细胞活力,当LPS浓度达到5ug/ml(P<0.05)和10ug/ml时(P<0.01),细胞活性被明显抑制;LPS作用2h时,自噬体膜标志性蛋白质LC3II/LC3I比值明显提高(P<0.05),于8h时其表达达到峰值(P<0.01),而于24h时蛋白表达有所回落,但仍然高于对照组(P<0.05);LPS作用2h时线粒体膜电位显著降低(P<0.01),持续到本实验观察点8h(P<0.05),随着作用时间延长,膜电位有回升的趋势,到24h观察点时,膜电位基本回到基线水平。与LPS组比较,预先给预3-MA再给予不同浓度LPS,3-MA可显著抑制不同浓度LPS作用下心肌细胞活性(P<0.05)。此时自噬体膜标志性蛋白质LC3II/I明显降低(P<0.05)。在2h,4h,8h时3MA对LPS作用下的MMP无显著作用,但16h,24h时3MA显著降低LPS作用下MMP(P<0.01)结论:LPS可以诱导自噬发生,并可显著降低乳鼠心肌细胞活性及线粒体膜电位。而抑制自噬可以加重这种损害。说明自噬在脓毒症心肌抑制中起保护作用,而这或是通过调节线粒体的功能来实现的。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
材料和方法  12-19
结果  19-23
讨论  23-26
结论  26-27
参考文献  27-29
综述  29-38
  参考文献  35-38
致谢  38

自吞噬对脓毒症乳鼠心肌细胞活性及线粒体膜电位的影响

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