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Cdc25c介导的G2/M期检查点调控对人肿瘤细胞株A549低剂量辐射超敏感性的影响

作　者: 崔莹珊
导　师: 程晶
学　校: 华中科技大学
专　业: 肿瘤学
关键词: G2/M期检查点低剂量辐射超敏感性 Cdc25c
分类号: R730.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:通过下调Cdc25c蛋白的表达来调控细胞周期检查点,观察其对HRS/IRR的影响,探讨HRS/IRR现象的发生机制。方法:构建靶向人Cdc25c基因的特异性干扰质粒pGCsi-RNA1~3,脂质体转染A549细胞,RT-PCR及Western blot筛选最有效干扰质粒后,构建稳定转染靶向Cdc25c最有效干扰质粒的细胞株A549#和稳定转染阴性质粒的细胞株A549*;RT-PCR及Western blot鉴定A549#细胞中Cdc25c在mRNA水平和蛋白水平表达较A549*细胞是否明显下降。对A549#和A549*细胞进行不同剂量X线照射后,采用流式分选细胞技术克隆形成法分析细胞存活率,观察两种细胞对低剂量辐射的敏感性差异;流式细胞术检测两种细胞放疗前后细胞周期分布差异;Western blot检测两种细胞不同剂量X线照射后Cdc25c及P-Cdc25c(Ser216)蛋白表达水平变化。结果:(1)干扰质粒pGCsi-RNA1下调Cdc25c表达的作用最强,且稳定转染干扰质粒pGCsi-RNA1的A549#细胞中Cdc25c的表达较转染阴性质粒的A549*细胞明显降低(p<0.05)。(2)在不同剂量X线照射后A549#和A549*细胞均表现出HRS/IRR现象,且A549#细胞低剂量辐射超敏感性效应增加。(3)A549*细胞未照射与低剂量照射(<0.2Gy)时未出现G2/M期细胞比例增多,在高于0.2Gy剂量照射后出现G2/M期增多,提示较高剂量激活G2/M期检查点,产生G.2/M期阻滞;而A549#细胞未照射时已出现G2/M期增多,提示下调Cdc25c蛋白后G2期延长;A549#细胞在低于0.3Gy剂量照射后出现的G2/M期增高与对照组相比无明显差异,在高于0.3Gy照射后G2/M期明显增多,且出现时间较对照组提前,提示G2/M期检查点在较高剂量被激活,且活化剂量阈值较A549*细胞升高。(4)A549*在0.3Gy剂量照射时开始出现P-Cdc25c(Ser216)的表达及Cdc25c表达下降;A549#在高于0.3Gy剂量照射时开始出现P-Cdc25c(Ser216)的表达及Cdc25c表达下降,提示P-Cdc25c(Ser216)的表达和Cdc25c表达下降的变化情况与G2/M期阻滞呈极度相关性。结论:低剂量辐射超敏感性与G2/M期检查点密切相关,其效应与细胞周期调控有关;而Cdc25c及Phospho-Cdc25c (ser216)蛋白表达与G2/M期检查点密切相关。

全文目录

英文缩略词表  5-7
中文摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
前言  11-13
材料与方法  13-28
结果  28-34
讨论  34-37
结论  37-38
参考文献  38-41
综述  41-48
  参考文献  45-48
致谢  48

Cdc25c介导的G2/M期检查点调控对人肿瘤细胞株A549低剂量辐射超敏感性的影响

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