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microRNAs介导的去甲基化抑制胃癌细胞B7-H1的表达

作 者: 李伟
导 师: 陶凯雄
学 校: 华中科技大学
专 业: 外科学
关键词: 去甲基化 胃癌 B7-H1 miR-152 miR-200b
分类号: R735.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 7次
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内容摘要


目的:探讨microRNAs介导的去甲基化抑制胃癌细胞B7-H1的表达方法:流式检测不同浓度5-Aza-Cd处理5天和100u/ml的IFN-γ刺激24小时AGS的B7-H1表达;microRNA芯片检测B7-H1阴性的5-Aza-Cd处理5天和100u/ml的IFN-γ刺激24小时的AGS和B7-H1阳性的仅100u/ml的IFN-γ刺激24小时的AGS两组microRNA表达谱差异,并结合microRNA作用靶点预测软件(TARGETSCAN)筛选出7个候选microRNAs,进一步通过转染microRNAs模拟体和双荧光素酶报告载体筛选出靶向作用于B7-H1mRNA的microRNA;定量PCR检测不同浓度5-Aza-Cd处理5天AGS的microRNA表达和焦磷酸测序检测microRNA上游DNA的CpG岛甲基化状态,统计分析5-Aza-Cd浓度、microRNA表达及microRNA上游DNA的CpG岛甲基化水平之间的关系。结果:随着5-Aza-Cd浓度增加,AGS细胞B7-H1表达逐渐增加;筛选出的miR-152miR-200b靶向作用于B7-H1mRNA抑制B7-H1基因表达;5-Aza-Cd可促进miR-152和miR-200b的表达;5-Aza-Cd导致miR-152基因上游DNA甲基化水平从15.46%降至0.23%,差异有统计学意义(p<0.05); 5-Aza-Cd使miR-200b基因上游DNA甲基化水平从37.6%降至22.2%,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:去甲基化促进miR-152和miR-200b表达并靶向作用于B7-H1 mRNA抑制胃癌细胞表达B7-H1

全文目录


中文摘要  6-7
Abstract  7-9
前言  9-10
材料和方法  10-22
实验结果  22-38
讨论  38-41
参考文献  41-46
致谢  46-47
附录  47

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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