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MicroRNA在PCOS大鼠模型卵巢中的表达

作 者: 孔凡静
导 师: 钟刚
学 校: 华中科技大学
专 业: 妇产科学
关键词: miRNA 多囊卵巢综合症 胰岛素抵抗 细胞凋亡
分类号: R711.75
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 22次
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内容摘要


第一部分构建PCOS大鼠模型及检测PCOS大鼠卵巢microRNA (miRNA)的表达谱目的:1、构建脱氢表雄酮(DHEA)诱导幼年雌性Wistar大鼠多囊卵巢综合症(PCOS)模型,并分析其胰岛素抵抗特征。2、微阵列芯片检测正常大鼠和PCOS大鼠的卵巢组织miRNA表达谱,分析两组大鼠卵巢组织miRNA表达谱的差异。方法:1、选取21日龄断奶的Wistar大鼠40只,随机分组为模型组和对照组,各20只,皮下注射DHEA建立大鼠PCOS模型:DHEA6mg/100g+0.2ml注射用油剂×20天,对照组于同时间皮下注射无菌注射用油剂。采用以下方法验证模型:显微镜下观察阴道涂片判断大鼠所处动情周期的时相;全自动化学发光检测仪测定血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH);放射免疫学方法测定空腹血清胰岛素(FINS),血糖仪测定空腹血糖(FBG),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA1-IR);测定大鼠体重和卵巢重量;卵巢组织切片,HE染色,并观察其形态学变化。2、取出大鼠双侧卵巢,并行心脏采血,留取血清。微阵列芯片检测两组大鼠卵巢组织中miRNA的表达谱,比较分析两组大鼠miRNA表达谱的差异。结果:1、PCOS模型组大鼠失去正常的动情周期,而对照组大鼠具有规律的动情周期。与对照组比较,PCOS模型组T、FBG、FINS、HOMA1-IR显著升高(分别均P<0.01),PCOS模型组大鼠体重无显著改变,去除体重影响后PCOS模型组大鼠卵巢重量显著大于对照组(P<0.05)。卵巢切片HE染色显示:PCOS模型组卵巢有较多不规则的卵泡呈囊状扩张,发育阶段卵泡及黄体数目明显减少,颗粒细胞层数减少甚至消失。对照组可见不同发育阶段的卵泡及多个黄体。2、与对照组比较,PCOS大鼠卵巢组织中表达存在显著差异的miRNA有48个,22个表达上调,包括miR-320、miR-296、miR-323*、miR-330和miR-145等;26个表达下调,包括miR-21、miR-10b、miR-290、miR-352和miR-146b等。结论:1、DHEA诱导幼年雌性Wistar大鼠PCOS模型的卵巢病理改变及血内分泌改变与PCOS病人相似,并存在胰岛素抵抗现象。2、两组大鼠卵巢组织miRNA表达谱存在显著差异,表达存在显著差异的miRNA可能参与PCOS的发病过程。第二部分MiR-21和miR-320在大鼠卵巢中的表达及其在PCOS发病机制中的可能作用目的:1、检测miR-21和miR-320在PCOS模型组和对照组大鼠卵巢组织中的表达,进一步验证微阵列芯片结果。2、分别比较miR-21、miR-320在两组大鼠卵巢组织的表达差异,初步探讨二者在PCOS发病中的可能作用。方法:实时荧光定量PCR检测PCOS模型组和对照组大鼠卵巢组织miR-21和miR-320的表达。结果: PCOS模型组大鼠卵巢组织中miR-21的表达水平显著低于对照组(P<0.01),而miR-320的表达水平显著高于对照组(P<0.01),且荧光实时定量PCR结果与微陈列芯片结果趋势一致。结论:大鼠卵巢组织中存在MiR-21和miR-320的表达,且二者在PCOS模型组和对照组的表达均存在显著差异,提示miR-21和miR-320可能参与PCOS的发病过程。

全文目录


主要英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-13
前言  13-15
第一部分 构建 PCOS 大鼠模型并检测 PCOS 大鼠卵巢 miRNA 的表达谱  15-25
  目的  15
  材料与方法  15-20
  结果  20-24
  小结  24-25
第二部分 MiR-21 和 miR-320 在大鼠卵巢的表达及其在 PCOS 发病机制中的可能作用  25-30
  目的  25
  材料与方法  25-28
  统计方法  28
  结果  28-29
  小结  29-30
讨论  30-37
参考文献  37-41
综述 MicroRNA与女性生殖系统  41-51
  参考文献  47-51
致谢  51

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中图分类: > 医药、卫生 > 妇产科学 > 妇科学 > 女性生殖器其他疾病 > 卵巢疾病
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