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Trop2在体外模拟的心梗炎性环境中介导心脏c-kit~+细胞保护作用的研究

作　者: 孙微
导　师: 夏家红
学　校: 华中科技大学
专　业: 心血管外科学
关键词: 心脏c-kit+干细胞 Trop2基因细胞凋亡
分类号: R542.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 4次
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内容摘要

目的:向心肌损伤部位提供来源不同的可分化细胞,可促进心肌和微血管再生,进而改善心功能。研究发现心脏祖细胞(CPCs)具有较强的自我更新、克隆形成和多向分化潜能,易于产生有效电偶联,比其它来源的细胞更适合用于修复心梗组织,但其细胞在缺血缺氧和炎症梗死环境中的利用率极低。Trop2是一种表达于细胞膜表面的糖蛋白,能增强多种细胞的生存能力,但尚无相关研究证实其对CPCs的作用。本实验旨在观察Trop2是否能提高CPCs的抗凋亡能力,以期提高CPCs治疗心梗的利用率。方法:将冻存的c-kit+细胞复苏、传代之后分为3组:c-kit+细胞转染Trop2基因组,c-kit+细胞沉默Trop2基因组,c-kit+细胞组。分别接受H2O2(0,30,60,120μmol/L培养1h)、缺氧(0,5%,10%,21%O2培养48h)和LPS(脂多糖0,10,100,1000 ng/ml培养24h)的刺激。流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率。Western-blot检测各组细胞中PKCα、Raf-1、Bcl-2、Bax的表达水平以及PKCα、Raf-1的磷酸化水平。实验均重复3次。结果:Trop2基因能够促进小鼠心脏c-kit+细胞抗凋亡。流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率发现,在H2O2、缺氧和LPS刺激下,Trop2过表达组细胞凋亡率均低于对照组和/或沉默组。Western-blot检测发现,Trop2过表达组与其它两组相比,Bcl-2表达水平以及PKCα、Raf-1的磷酸化水平上调,Bax表达水平下调。结论:Trop2具有促进c-kit+细胞在模拟的心梗微环境中抗凋亡的能力。其机制可能是通过Trop2活化,激活PKCα,磷酸化更多的Trop2,形成正反馈。进而上调Bcl-2和下调Bax表达水平,启动线粒体凋亡途径,以及磷酸化Raf-1,通过Ras/Raf/MEK/ERK通路,发挥抗凋亡效应。但Trop2的配体迄今尚未发现,因此Trop2的具体活化机制尚有待于进一步研究。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-13
材料  13-19
方法  19-26
附图  26-32
实验结果  32-45
讨论  45-49
问题与展望  49-50
参考文献  50-53
综述一  53-61
  参考文献  58-61
综述二  61-65
  参考文献  63-65
致谢  65-66

Trop2在体外模拟的心梗炎性环境中介导心脏c-kit~+细胞保护作用的研究

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