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动态压应力与PTHrP对体外培养大鼠前软骨干细胞生物学特性的影响

作 者: 陈杰
导 师: 陈安民
学 校: 华中科技大学
专 业: 外科学
关键词: 前软骨干细胞 动态压应力 PTHrP Sox9 细胞增殖 细胞外基质
分类号: R329
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 2次
引 用: 0次
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内容摘要


目的平板及微球培养纯化的前软骨干细胞(PSCs),对其进行动态压应力刺激及添加甲状腺激素相关肽(PTHrP)干预,进一步揭示前软骨干细胞的增殖、分化规律及其调控机制,为选择有效干预措施治疗骺板发育异常、修复及重建骺板等提供理论及实验依据。方法取材新生SD大鼠股骨干骺端软骨,免疫磁珠分选纯化,分别进行二维及三维分组培养,随机分组后适宜压应力(90mmg)及添加不同浓度PTHrP干预下连续培养,并设对照组(不干预),细胞计数及cck-8法检测细胞增殖情况,免疫组化法测定三维培养软骨细胞成软骨特异性细胞外基质Ⅱ型胶原(CollagenⅡ),RT-PCR法测定CollagenⅡ、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、PTHrP、X型胶原、TGF-β1等。根据实验结果评价应力及PTHrP对前软骨干细胞生物学性状的影响。结果1免疫磁珠分选培养出生长状态良好的前软骨干细胞,免疫组化、免疫荧光鉴定显示细胞稳定表达相对特异性标志物FGFR-3与PCNA;适宜参数压应力刺激与PTHrP干预组细胞培养至5代以上仍状态较好,而对照组细胞致5代已老化;2细胞计数及cck-8法检测细胞增殖能力有效干预组较对照组增大(P﹤0.05)其中应力刺激与PTHrP干预有协同效应。3 RT-PCR检测结果显示有效刺激实验组CollagenⅡ、aggrecan、Sox9表达较空白对照组升高,X型胶原降低,(P﹤0.05)90mmg压力刺激组PTHrP、TGF-β1、IGF-1表达水平增强。(P﹤0.05)结论压应力刺激与体外PTHrP干预均能影响PSCs的增值和分化。其中90mmg压应力间断刺激组细胞增殖作用明显,终末分化时间延长,可能与压应力导致细胞内PTHrP表达增高有关;小剂量(0.1nmol/L)PTHrP干预对细胞增殖有促进作用且延迟其终末分化,Sox9可能为其靶点;压应力刺激及PTHrP干预对PSCs的增殖和细胞外基质的分泌影响有协同作用。

全文目录


前言  5-7
中文摘要  7-8
Abstract  8-10
1 主要材料与实验器材  10-11
2 方法  11-23
3 结果  23-30
4 讨论  30-32
参考文献  32-35
综述  35-49
  参考文献  42-49
致谢  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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