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小麦郑9023新型储藏蛋白基因avenin-like b的克隆和原核表达分析

作　者: 王洪文
导　师: 汪越胜；何光源
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 小麦郑9023 加工品质 avenin-like b 基因克隆原核表达
分类号: S512.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

小麦品质是小麦籽粒对其终用途的适合性,包括营养品质和加工品质两方面。与国外相比,我国小麦的加工品质还有差距,而人们对优良加工品质小麦的需求日益加大,因此小麦加工品质改良仍然是目前小麦育种的重要目标。小麦品质改良最有效的途径之一是发掘优良品质基因,并运用常规杂交育种和转基因技术培育优质新品种。小麦Avenin-like基因是新近发现的一类新型的种子储藏蛋白基因,分为Avenin-like type a和Avenin-like type b两类。目前还未见有关Avenin-like蛋白与小麦加工品质关系的研究报道。本研究以小麦郑9023为研究对象,分离avenin-like b基因,进行表达并制备该蛋白抗体,试图分析Avenin-like b蛋白整合进入面筋蛋白聚合体的依据。主要研究结果如下:(1)从小麦郑9023的基因组中克隆得到4个新型avenin-like b基因的ORF,长度为855bp,编码的蛋白含有19个半胱氨酸残基,存在着典型的“Cys-Cys”结构域,前18个氨基酸为信号肽序列。(2)本课题成功构建了avenin-like b基因的原核表达载体pET-32a-avelb,实现了Avenin-like b蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli )BL21内表达和该蛋白的亲和纯化过程。并将纯化的Avenin-like b蛋白免疫兔子,制备了针对Avenin-like b蛋白的多克隆抗体。(3)用本研究制备的多克隆抗体,应用Western blot方法,在小麦郑9023材料中检测到Avenin-like b蛋白。为进一步分析Avenin-like b蛋白是否参与面筋蛋白聚合体形成奠定了基础。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
1 绪论  8-15
  1.1 小麦储藏蛋白研究进展  8-11
  1.2 小麦加工品质  11-13
  1.3 本研究的主要目的和内容  13-15
2 新型avenin-like b 基因的克隆  15-25
  2.1 绪言  15
  2.2 实验器材  15-16
  2.3 实验方法  16-21
  2.4 实验结果  21-23
  2.5 讨论  23
  2.6 本章小结  23-25
3 avenin-like b 基因的生物信息学研究  25-31
  3.1 绪言  25
  3.2 实验方法  25
  3.3 实验结果  25-30
  3.4 讨论  30
  3.5 本章小结  30-31
4 avenin-like b 基因原核表达及多克隆抗体的制备  31-46
  4.1 前言  31
  4.2 实验器材  31-35
  4.3 实验方法  35-41
  4.4 实验结果  41-45
  4.5 讨论  45
  4.6 本章小结  45-46
5 总结与展望  46-48
  5.1 主要研究结果  46-47
  5.2 有待继续开展的工作  47-48
致谢  48-49
参考文献  49-54
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文  54-55
附录2 本研究克隆的avenin-like b 基因序列  55-56

小麦郑9023新型储藏蛋白基因avenin-like b的克隆和原核表达分析

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