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液化石油气中毒对神经发生和学习记忆的影响及bFGF的干预作用

作　者: 薛昌强
导　师: 杨伯宁
学　校: 广西医科大学
专　业: 人体解剖学
关键词: 液化石油气碱性成纤维细胞生长因子神经发生学习记忆
分类号: R595.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:探讨液化石油气急性中毒对认知功能损害的机理及bFGF对急性液化石油气中毒的干预和治疗作用。方法:选用25-40克SPF级雌性昆明小鼠75只,随机分为五组,分别为对照组(control)、液化石油气低剂量中毒组(LPG-L)、液化石油气高剂量中毒组(LPG-H)、bFGF预防性干预组(bFGF-P)和bFGF治疗性干预组(bFGF-T),每组15只。使用自制的透明密闭有机玻璃中毒箱行染毒实验,注入液化石油气制成体积分数为25%和50%浓度进行染毒。分别于中毒前和中毒后一小腹腔注射碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)(8μg/kg体重)对中毒过程进行干预,对照组和LPG组则给予腹腔注射等量的生理盐水。第2天开始用Morris水迷宫(Morris Water Maze, MWM)对小鼠进行学习记忆能力的测试。灌注处死后,分别采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2’-deoxyuridine,BrdU)免疫组织化学染色标记增殖细胞,胶原原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色方法标记星形胶质细胞(astrocyte, AS)。检测海马齿状回颗粒细胞下层(subgranular zone,SGZ)及侧脑室室管膜下区(subventricular zone,SVZ)的BrdU及GFAP阳性细胞的分布及数量等情况。计量资料差异的比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)。记忆成绩、BrdU阳性细胞数目和GFAP阳性细胞数目之间分别进行线性相关分析。结果:1.学习成绩方面:低、高LPG染毒组学习成绩显著性下降(P < 0.01),且具有一定的量效关系(P < 0.01);而bFGF组学习成绩高于LPG各剂量组(P < 0.01),bFGF-P组高于bFGF-T组(P < 0.01)。在空间探索试验中,bFGF组与LPG组相比,穿环次数显著性增加(P < 0.01),且LPG-H组低于LPG-L组(P < 0.05),bFGF-P组高于bFGF-T组(P < 0.05)。2.神经增殖方面:两LPG组SGZ及SVZ内BrdU阳性细胞数目均低于其他组(P < 0.01),且LPG-H组少于LPG-L组(P < 0.01);但两bFGF组SGZ及SVZ内BrdU阳性细胞数目高于LPG组(P < 0.01),且bFGF-P组高于bFGF-T组(P < 0.01)。3. GFAP表达方面:染毒组和干预组小鼠DG及SVZ内GFAP阳性细胞数目均上升(P < 0.01);LPG-H组高于LPG-L组(P < 0.01);两bFGF组DG及SVZ内GFAP阳性细胞数目低于LPG组(P < 0.01),且bFGF-P组低于bFGF-T组(P < 0.01)。4.相关性分析结果显示:BrdU阳性细胞数目与小鼠的记忆能力呈正相关;GFAP阳性细胞数目与小鼠的记忆能力和BrdU阳性细胞数目均呈负相关。结论:1.液化石油气中毒能够抑制小鼠海马齿状回颗粒细胞下层和侧脑室室管膜下区的神经发生,增加星形胶质细胞的数目,并能损害小鼠学习记忆能力,且随中毒浓度的增加其损伤作用愈明显,有一定的量效关系。2.碱性成纤维细胞生长因子能提高神经发生,改善中毒小鼠学习记忆能力。本研究结果提示bFGF对液化石油气中毒有预防和治疗作用,其机理可能与促进、保护脑内的神经发生和抑制星形胶质细胞的激活有关。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-11
材料与方法  11-20
  （一）实验动物分组  11
  （二）主要试剂与材料  11-12
  （三）主要仪器  12-13
  （四）染毒及干预过程  13-14
  （五） Morris水迷宫行为学测试  14-15
  （六） 5-溴脱氧尿嘧啶核苷注射  15
  （七）灌注取脑及组织切片的制备  15-16
  （八）免疫组织化学染色步骤  16-19
  （九）数据的统计学分析  19-20
结果  20-29
  （一）水迷宫训练实验结果  20-23
  （二） BrdU 免疫组织化学染色结果  23-24
  （三） GFAP 免疫组织化学染色结果  24-26
  （四）相关性分析  26-29
讨论  29-34
  （一） LPG 中毒模型的建立  29
  （二）神经干细胞增殖状态检测方法  29-30
  （三） LPG 对神经发生的影响及其与学习记忆能力的关系  30-31
  （四）bFGF 对LPG 中毒的干预和治疗作用  31-32
  （五） bFGF 对LPG 中毒模型小鼠星形胶质细胞的影响  32-33
  （六）在LPG 中毒模型中星形胶质细胞的活化增殖与神经发生的关系  33-34
结论  34-38
英文缩写词表  38-39
参考文献  39-44
综述  44-61
  参考文献  52-61
致谢  61-62
攻读硕士研究生期间发表的论文  62

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