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目的:正畸牙齿移动会产生不同程度的牙根吸收。目前正畸医生通过减小力值,减少加力时间等方法将牙根吸收的程度降到了最低,这种小范围的牙根吸收可自行部分修复,但是其修复效果不佳。正畸牙根吸收的不可避免性使得口腔专家对牙根修复的研究逐渐关注,并且多年来坚持不懈地探索能促进牙根修复的方法及药物。研究证明甲状旁腺素是一种很好的促进骨形成的激素,间断少量应用甲状旁腺素具有促进骨组织修复的效应,在甲状旁腺素的所有片段中PTH(1-34)活性最强。因此本实验通过给牙根吸收动物模型间断少量应用PTH(1-34)观察其对牙根吸收后修复能否产生影响,目前国内外尚缺乏此方面的实验研究。通过间断应用PTH(1-34)促进牙根修复是一种新颖的研究方法,也是一个值得探索的途径。本实验通过建立大鼠牙齿移动性根吸收模型后,在不同时间段皮下间断注射少量的PTH(1-34)作以下几方面的研究:1,研究不同时间段牙根吸收表面及临近牙周组织中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性的破骨细胞数目变化,2,不同时间段牙根吸收陷窝中修复性牙骨质相对面积值变化;3,免疫组织化学测定不同时间段牙根吸收陷窝及其周围组织中骨保护素(OPG)及其配体破骨细胞核因子KB受体活化因子配基(RANKL)的表达变化。探讨PTH(1-34)对于牙根吸收后再修复能否产生影响。方法:1,Wistar大鼠牙根吸收的模型的建立及分组。将63只6-8周体重200-250g雄性成年Wistar大鼠常规喂养一周后,在一侧上颌第一磨牙与前牙之间安装一个0.012英寸的镍钛拉簧加以0.5N的力后,以前牙为支抗拉第一磨牙向近中持续移动10天建立牙根吸收动物模型。2,拆除牙齿移动装置后对大鼠重新称重应用随机数字表按质量随机分为21小组每组3只,其中空白对照组,阴性对照组,实验组各7小组。各组大鼠做如下实验处理:空白对照组不注射任何药品,分别在拆除装置当天、7天、10天、14天、17天、21天、25天处死各3只取材;阴性对照组除拆除装置当日处死3只外,其余大鼠中断加力当天起每只皮下注射5ml/Kg体重的生理盐水,以后隔日皮下注射5ml/Kg体重的生理盐水,并且分别在中断加力的7天、10天、14天、17天、21天、25天各处死3只取材。实验组除拆除装置当日处死3只外,中断加力当天起每只大鼠皮下注射5ml /Kg体重的PTH(1-34)盐水溶液(PTH含量:1ug/ml),以后隔日皮下注射5ml/Kg体重的PTH(1-34)盐水溶液,分别在中断加力的7天,10天,14天,17天,21天,25天各处死3只取材;以上取下的组织均包括所有磨牙及牙槽骨的完整组织。3,组织石蜡包埋,矢状连续切片,片厚3-5um,观察牙根吸收情况。选取第一磨牙及牙周组织完整的切片分别行HE染色,选择第一磨牙中央根与远中根压力侧作为实验区域,HE染色后应用图像分析软件对牙根吸收陷窝修复性牙骨质相对面积进行分析测量;TRAP染色选取各时像点实验牙中央根与远中根压力侧牙根面及临近牙周组织中15个高倍视野(×200)计数TRAP阳性染色的破骨细胞,计算均数;OPG及其配体RANKL免疫组织化学染色后,随机选取各个时像点牙周组织的15个高倍镜视野(×200),图像分析系统测得压力侧阳性染色区域的平均光密度值。4,统计学处理:SPSS13.0统计软件分析数据检验水准:双侧α=0.05,计量资料以均数±标准差(xˉ±s)表示,各组间比较采用单因素方差分析两两比较,采用q检验,同一样本不同时间比较采用重复测量方差分析,p<0.05表示统计学有意义。结果:1,模型建立情况:中断加力当天,HE切片观察各组实验牙牙根压力侧均可见牙槽骨边缘及牙根面出现骨吸收陷窝;牙根吸收主要发生在根中及少量根尖区,且吸收陷窝仅局限在牙骨质及极少量牙本质浅层,陷窝内可见多核破骨细胞。压力侧牙周膜变窄,牙周纤维排列紊乱;张力侧牙周膜间隙变宽,固有牙槽骨连续,牙周纤维伸展,细胞成分较多;证明牙根吸收模型复制成功。2,修复性牙骨质相对面积值变化:各组中断加力当天牙骨质修复相对面积均最小,随着中断加力时间的延长牙骨质修复相对面积呈逐渐增大趋势;0-25天,空白对照组与阴性对照组牙根修复相对面积组间两两比较无统计学差异(p>0.05);0-25天,实验组与空白对照组及阴性对照组牙骨质修复相对面积组间两两比较在0-17无统计学差异(p>0.05),在21-25天实验组牙骨质修复相对面积较空白对照组及阴性对照组增大显著,有显著统计学差异(p<0.05)。3,TRAP染色结果:各组中断加力当天,TRAP染色牙根吸收陷窝及临近牙周组织中可见大量阳性染色破骨细胞,随着中断加力时间的延长阳性染色破骨细胞数目逐渐减少,到14天时少见阳性破骨细胞,17天后未见到阳性破骨细胞。0-25天,各组牙根吸收陷窝及临近牙周组织中TRAP染色阳性破骨细胞数组间两两比较均无显著统计学差异(p>0.05)4,OPG免疫组织化学:各组0-25天,牙根吸收面及其临近牙周组织中均呈阳性表达; 0-25天,空白对照组,阴性对照组组间比较没有显著统计学差异(p>0.05);0-25天实验组与空白对照组及阴性对照组组间两两比较,21-25实验组显著增高,有显著统计学差异(p<0.05)。5,RANKL免疫组织化学:各组0-25天,牙根吸收面及临近牙周组织中均呈阳性表达。0-25天,空白对照组与阴性对照组组间比较没有显著统计学差异(p>0.05);0-25天,实验组与空白对照组及阴性对照组组间两两比较,在7-10天,21-25有显著统计学差异(p<0.05),实验组较空白对照组及阴性对照组7-10天显著增高,21-25天显著减少(p<0.05)。6,OPG/RANKL比值变化结果:各组0-17天呈减少趋势,21-25天呈升高趋势。0-25天,空白对照组与阴性对照组组间比较无统计学差异(p>0.05),实验组与空白对照组及阴性对照组组间两两比较实验组比值在7天时显著减少,21-25天比值显著增大,统计学差异显著(p<0.05),其他时相点无显著统计学差异(p>0.05)。结论:1,皮下间断注射少量PTH(1-34)对大鼠正畸性牙根吸收后的修复早期没有影响。2,皮下间断注射少量PTH(1-34)能够促进大鼠正畸性牙根吸收后晚期的修复。
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