学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

人源耐酸双歧杆菌的筛选及其性能评价

作　者: 方鸣玉
导　师: 杨虹
学　校: 上海交通大学
专　业: 生物工程
关键词: 人源双歧杆菌酸致死筛选耐酸菌株性能评价长双歧杆菌
分类号: R371
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 121次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

双歧杆菌是人和动物体内十分重要的益生菌群之一,目前,双歧杆菌的益生作用已经得到普遍认可,益生菌产品也得到了越来越广泛的研究和应用。益生菌制剂在服用过程中,需要保证一定剂量活的菌体最终进入人体肠道,才能对宿主产生益生作用,而人源双歧杆菌对胃部的低pH酸环境是高度敏感的。筛选出更加耐酸的人源双歧杆菌对双歧杆菌益生菌制品的生产应用具有重要意义。目前,用于提高菌株耐酸性的主要方法是用亚致死酸性条件短时间处理而使菌株增强耐酸性,可是已有研究表明这一方法并不适用于双歧杆菌。我们需要找出一种有效的方法来解决这一问题。本实验采用了将双歧杆菌长时间暴露在致死低pH环境下的酸致死筛选方法,用两种不同的处理顺序,从健康儿童的新鲜粪便中,筛选出了22株人源双歧杆菌,并分别对其进行了种属的分子鉴定和耐酸性能的评价,选出了耐酸性能最优的2株长双歧杆菌SQS7-31与SQS4-64。通过对这两株长双歧杆菌连续20代的无压力传代后的耐酸性能评价,研究其耐酸性能的遗传稳定性,比较两种不同的筛选处理顺序对耐酸菌株筛选结果的影响。研究结果表明这两株长双歧杆菌的耐酸性能可稳定遗传,直接对人体粪便通过酸致死处理来筛选双歧杆菌和先在温和条件下从粪便选出菌株再进行酸致死处理和筛选,均可以获得具有遗传稳定性的优良耐酸菌株。这个研究结果也验证了对已有文献相关论点的质疑,说明并非只有直接对人体粪便进行酸致死处理筛选才可获得优势耐酸双歧杆菌菌株。通过观察两株菌在不同胆汁盐浓度下生长迟滞情况对其耐胆汁盐性能进行评价;通过观察两株菌对超氧阴离子的清除能力,对它们的抗氧化性能进行评价;通过亚致死温度的短时间处理,对这两株耐酸菌株的耐热性能进行评价;通过计量菌体在模拟消化道中的幸存率,评价它们对人体不利环境的耐性。综合所有的评价结果,最终选出长双歧杆菌SQS7-31做为潜在的商业化生产菌株,该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏并申请了发明专利。目前,耐酸性能优良的长双歧杆菌SQS7-31已经被上海交大昂立股份有限公司做为生产备用菌株。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
第一章前言  10-24
  1.1 益生菌概述  10-17
    1.1.1 益生菌、益生元的概念  10-11
    1.1.2 适用于微生态制剂的益生菌菌种  11-13
    1.1.3 益生菌的益生性  13-14
    1.1.4 益生菌作用的基本理论  14-15
    1.1.5 益生菌的筛选标准和安全评价  15-17
    1.1.6 益生菌的应用  17
  1.2 双歧杆菌属  17-20
    1.2.1 双歧杆菌的生物学特性  17-18
    1.2.2 双歧杆菌的生物学分类  18-19
    1.2.3 双歧杆菌的生物功能及开发应用前景  19
    1.2.4 工业应用存在的问题  19-20
  1.3 耐酸双歧杆菌的研究进展  20-22
    1.3.1 双歧杆菌对体外酸环境的耐受性  20
    1.3.2 人源双歧杆菌对酸环境的耐受性  20-21
    1.3.3 提高双歧杆菌耐酸性的研究方法  21
    1.3.4 双歧杆菌的胁迫适应和交叉保护机制  21-22
  1.4 分子生物学方法在双歧杆菌鉴定中的应用  22-24
第二章课题的研究意义和研究方案  24-30
  2.1 研究意义  24-25
  2.2 研究方案  25-30
    2.2.1 人源双歧杆菌耐酸菌株的分步筛选和鉴定  25-26
    2.2.2 人源双歧杆菌的酸致死筛选和鉴定  26
    2.2.3 两种不同的筛选方式遗传稳定性的比较  26-27
    2.2.4 优势耐酸菌株的其他性能评价  27-30
第三章菌种的分离与鉴定  30-42
  3.1 仪器、试剂材料  30-32
    3.1.1 仪器  30
    3.1.2 主要药品和试剂  30-32
  3.2 实验方法  32-36
    3.2.1 耐酸人源双歧杆菌的分步酸致死筛选  32-35
    3.2.2 耐酸人源双歧杆菌的直接酸致死筛选  35-36
  3.3 实验结果与分析  36-40
    3.3.1 乳杆菌和双歧杆菌的革兰氏染色观察  36
    3.3.2 双歧杆菌16S rDNA 分子鉴定结果  36-40
  3.4 小结  40-42
第四章双歧杆菌耐酸性能的评价及其遗传稳定性研究  42-51
  4.1 仪器、试剂和材料  42-43
    4.1.1 仪器  42
    4.1.2 主要药品和试剂  42-43
    4.1.3 待测菌种信息  43
  4.2 实验方法  43-45
    4.2.1 菌株活化  43
    4.2.2 菌株生长曲线的测定  43
    4.2.3 菌株的耐酸性评价和比较  43-44
    4.2.4 菌株的耐酸性的遗传稳定性研究  44-45
  4.3 结果与讨论  45-51
    4.3.1 22 株实验菌株的耐酸性结果分析  45-46
    4.3.2 耐酸优势菌株的耐酸性能遗传稳定性分析  46-51
第五章耐酸双歧杆菌的其他耐性评价  51-60
  5.1 仪器、试剂材料  51-53
    5.1.1 实验仪器  51-52
    5.1.2 主要药品和试剂  52
    5.1.3 实验菌株信息  52-53
  5.2 实验方法  53-56
    5.2.1 耐酸菌株耐胆汁盐性能评价方法  53
    5.2.2 耐酸菌株抗氧化性能评价方法  53-54
    5.2.3 耐酸菌株耐热性能评价方法  54-55
    5.2.4 耐酸菌株对模拟消化道环境耐受性能评价方法  55-56
  5.3 实验结果与分析  56-60
    5.3.1 耐酸菌株耐胆汁盐性能结果分析  56
    5.3.2 耐酸菌株抗氧化性能结果分析  56-57
    5.3.3 耐酸菌株耐热性能结果分析  57-58
    5.3.4 耐酸菌株对模拟消化道环境耐受性能结果分析  58-60
第六章结论及创新点  60-62
  6.1 研究结论  60-61
  6.2 本文的创新点  61-62
参考文献  62-66
附录  66-75
致谢  75-76
攻读硕士学位期间已发表或录用的论文  76-78

人源耐酸双歧杆菌的筛选及其性能评价

内容摘要

全文目录

相似论文