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孕酮和减重步行训练对大鼠脊髓损伤后神经保护机制的实验研究

作　者: 卢节平
导　师: 丁新生
学　校: 南京医科大学
专　业: 神经病学
关键词: 脊髓损伤孕酮凋亡 caspase-3 减重步行训练脑源性神经营养因子
分类号: R651.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:1.探讨孕酮对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后早期细胞凋亡的影响。2.观察早期应用孕酮和减重步行训练对大鼠脊髓损伤后的运动功能、脊髓形态学及脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA表达的影响。方法:1.60只雄性SD大鼠随机分成假手术组、损伤组、孕酮组。采用改良的Allen’s撞击法制作SCI模型。孕酮组大鼠在造模成功后于1、6、24、48、72h腹腔注射16mg/kg的孕酮。术后6、24、48、75h取材,采用HE染色观察脊髓形态学的变化、免疫组织化学法检测半胱氨酸门冬氨酸特异性蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific protease-3,Caspase-3)的表达、原位末端标记法(TUNEL染色)检测细胞凋亡。2.120只雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、孕酮组、训练组、联合组(孕酮+训练) ,前三组各30只大鼠(每组分为第1、3、7、14、21、28天6个亚组各5只),后两组各15只大鼠(每组分为第14、21、28天3个亚组各5只)。采用改良的Allen’s撞击法制成SCI模型。孕酮在术后30min、6h、24h、48h、72h以4mg/kg的剂量腹腔注射;减重步行训练在术后1周开始,训练14天。术后不同时间点以BBB评分(Basso-Beattie-Bresnahan scales)评估大鼠后肢运动功能,HE染色观察脊髓形态学的变化,RT-PCR法检测BDNF mRNA的表达水平。结果:1.假手术组大鼠脊髓形态正常,偶见凋亡细胞及Caspase-3阳性细胞;与损伤组相比,孕酮组术后各时间点的凋亡指数下降、Caspase-3阳性细胞数显著减少,差异有统计学意义。2.孕酮和训练均可促进大鼠后肢运动功能恢复和受损脊髓的出血吸收、神经再生,并具有协同效应。RT-PCR结果显示假手术组BDNF mRNA低表达;模型组在3天内升高;孕酮组在1周内高表达,高峰在第3天;训练组从第14天开始表达明显增高,训练停止1周后仍维持在高水平;联合组BDNF mRNA的表达水平较孕酮组或训练组更高(P<0.01)。结论:1.抑制脊髓损伤后的细胞凋亡可能是孕酮的神经保护作用机制之一。2.早期应用孕酮和减重步行训练均能促进SCI大鼠的运动功能恢复,其机制之一可能是上调局部BDNF mRNA的表达,促进神经再生;两者联合应用的效果比单一应用更好。

全文目录

中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-13
第一部分孕酮对大鼠脊髓损伤后早期细胞凋亡影响的实验研究  13-34
  材料和方法  13-19
    1 实验材料  13-15
    2 实验方法  15-18
    3 图像分析  18
    4 统计学分析  18-19
  结果  19-23
    1 HE 染色  19
    2 Caspase-3 免疫组织化学染色检测  19-21
    3 凋亡细胞检测结果  21-23
  讨论  23-27
  结论  27-28
  参考文献  28-34
第二部分大鼠脊髓损伤后早期应用孕酮联合减重步行训练的干预作用  34-54
  材料和方法  34-43
    1 实验材料  34-35
    2 实验方法  35-42
    3 统计学分析  42-43
  结果  43-48
    1 大鼠运动功能的变化  43-44
    2 受损脊髓形态学变化  44-45
    3 BDNF mRNA表达变化  45-48
  讨论  48-51
  结论  51-52
  参考文献  52-54
综述  54-62
  参考文献  59-62
攻读学位期间发表文章情况  62-63
致谢  63

孕酮和减重步行训练对大鼠脊髓损伤后神经保护机制的实验研究

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