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翡翠贻贝糖胺聚糖抗肿瘤活性及其免疫调节作用的研究

作　者: 李瑞
导　师: 吴红棉
学　校: 广东海洋大学
专　业: 水产品加工及贮藏工程
关键词: 翡翠贻贝 糖胺聚糖 提取条件优化 抗肿瘤活性 免疫调节作用
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 84次
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内容摘要


目的:以翡翠贻贝全脏器为原料,优化翡翠贻贝糖胺聚糖粗品（PVG）的提取工艺条件,经初步纯化后对其抗肿瘤活性进行研究,并探讨其在免疫调节作用方面的抗肿瘤机理。方法:1.采用二次回归正交旋转组合设计研究料液比、加酶量、酶解时间3个因素对糖胺聚糖粗品得率与糖胺聚糖含量乘积的影响,从而确定翡翠贻贝糖胺聚糖粗品（PVG）提取的最佳工艺条件。2.将粗品溶解后,调整溶液pH值,使大部分蛋白沉淀后,冷冻干燥得精制品（PVG-1）,DEAE-52-纤维素纯化PVG-1得到翡翠贻贝糖胺聚糖纯化品（PVG-1a）3.采用最大耐受剂量实验对PVG-1的急性毒性进行检验。4.MTT法检测PVG-1和PVG-1a对体外培养的K562慢性髓性白血病细胞、CNE-2Z人鼻咽癌细胞和S180骨肉瘤细胞的抑制作用,并探讨PVG-1和PVG-1a对5-Fu的增敏作用;在体外实验基础上,体内实验验证PVG-1对S180移植瘤的抑制作用。5.采用计算免疫器官指数法检测PVG-1对正常小鼠、免疫抑制小鼠及荷瘤小鼠的脾指数、胸腺指数的影响;检测PVG、PVG-1、PVG-1a体外对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红及产生一氧化氮（NO）能力的影响;通过脾细胞增殖实验检测PVG、PVG-1、PVG-1a体外对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;通过脾淋巴细胞与K562肿瘤细胞的共培养,体外检测PVG、PVG-1、PVG-1a对自然杀伤细胞（NK细胞）活性的影响。结果:1.获得了翡翠贻贝糖胺聚糖提取的最佳工艺组合:液料比2.30:1、加酶量0.94%、酶解时间3.46h,模型预测值为25.50(×10-4),重复验证实验结果与预测值的标准误差为1.10%,低于5%。重复验证实验糖胺聚糖粗品平均得率为0.99%,糖胺聚糖平均含量为26.04%。2.经过初步精制和离子交换柱层析纯化,翡翠贻贝糖胺聚糖的含量逐步提高,精制品PVG-1中糖胺聚糖含量为45.6%;经柱层析后的纯化品中糖胺聚糖含量为59.4%。3.最大耐受量实验结果显示,翡翠贻贝糖胺聚糖精制品PVG-1对小鼠的经口急性毒性剂量大于15.0 g·kg-1。4.（1）PVG-1对K562慢性髓性白血病细胞、CNE-2Z人鼻咽癌细胞的生长有抑制作用;PVG-1和PVG-1a对体外培养的S180骨肉瘤细胞的生长有显著抑制作用;PVG-1、PVG-1a与5-Fu合用可以增敏5-Fu的抗肿瘤药效。（2）PVG-1对小鼠体内S180移植瘤的生长具有显著抑制作用,200 mg·kg-1的PVG-1的抑制率达到60.6%;CTX与PVG-1合用组的抑制率达到78.8%,显著提高了CTX的抑瘤效果。5.（1）PVG-1能够提高正常小鼠脾指数和胸腺指数,200mg/kg剂量PVG-1对正常小鼠脾指数的提高最明显,100mg/kg剂量PVG-1对对正常小鼠胸腺指数的提高最明显; PVG-1能够修复由CTX引起的小鼠免疫低下状况。（2）PVG-1各剂量组都能够提高荷瘤小鼠的脾指数和胸腺指数,在所选实验剂量范围内表现出良好的剂量效应关系;PVG-1中剂量（100 mg/kg）能修复由于CTX治疗肿瘤的同时导致的荷瘤小鼠免疫低下。（3）PVG、PVG-1和PVG-1a能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红和产生NO的能力; PVG、PVG-1和PVG-1a各剂量组均能显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖,样品相同剂量条件下,PVG-1a的刺激指数高于PVG-1,PVG-1高于PVG;200μg/ml的PVG-1a与ConA协同刺激脾淋巴细胞增殖的效果最好,刺激指数达到1.63。（4）PVG、PVG-1和PVG-1a的四个剂量作用的NK细胞能够增强NK细胞的杀伤活性;PVG-1a组作用的NK细胞在总体上杀伤活性好于PVG、PVG-1。结论:通过响应面分析得到翡翠贻贝糖胺聚糖提取的最佳工艺条件;翡翠贻贝糖胺聚糖对K562、CNE-2Z和S180肿瘤细胞有抑制作用,能增敏5-Fu和CTX的抗肿瘤药效;翡翠贻贝糖胺聚糖具有调节免疫功能,其体内抗肿瘤作用机理之一可能是调节机体免疫力。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-13
1 绪论  13-22
  1.1 研究背景  13-20
    1.1.1 海洋抗肿瘤药物的开发  13-18
    1.1.2 翡翠贻贝全脏器的开发利用概况  18-20
  1.2 本论文研究的目的与意义  20-22
    1.2.1 本研究的目的意义  20
    1.2.2 本研究的主要内容  20-22
2 响应面法优化翡翠贻贝糖胺聚糖提取工艺的研究  22-36
  2.1 引言  22
  2.2 材料与方法  22-27
    2.2.1 实验材料  22
    2.2.2 主要实验仪器及设备  22-23
    2.2.3 实验方法  23-27
  2.3 结果与分析  27-34
    2.3.1 翡翠贻贝糖胺聚糖粗品PVG 提取单因素实验  27-29
    2.3.2 响应面分析  29-34
  2.4 讨论  34-35
  2.5 本章小结  35-36
3 翡翠贻贝糖胺聚糖的纯化及安全性初步评价  36-41
  3.1 引言  36
  3.2 材料与方法  36-38
    3.2.1 实验材料  36-37
    3.2.2 主要实验仪器及设备  37
    3.2.3 实验方法  37-38
  3.3 结果与分析  38-40
    3.3.1 翡翠贻贝糖胺聚糖纯化结果  38-39
    3.3.2 翡翠贻贝糖胺聚糖急性毒性实验  39-40
  3.4 讨论  40
  3.5 本章小结  40-41
4 翡翠贻贝糖胺聚糖抗肿瘤活性实验研究  41-61
  4.1 引言  41
  4.2 材料与方法  41-44
    4.2.1 受试物  41-42
    4.2.2 实验材料  42
    4.2.3 主要实验仪器及设备  42
    4.2.4 实验设计与方法  42-44
  4.3 结果与分析  44-57
    4.3.1 翡翠贻贝糖胺聚糖体外对三种肿瘤细胞的抑制作用  44-56
    4.3.2 翡翠贻贝精制品 PVG-1 体内对 S180 肿瘤的抑制作用  56-57
  4.4 讨论  57-58
  4.5 本章小结  58-61
5 翡翠贻贝糖胺聚糖免疫调节功能的实验研究  61-75
  5.1 引言  61
  5.2 材料与方法  61-65
    5.2.1 受试物  61
    5.2.2 实验材料  61-62
    5.2.3 主要实验仪器及设备  62
    5.2.4 实验设计与方法  62-65
  5.3 结果与分析  65-70
    5.3.1 翡翠贻贝糖胺聚糖对正常小鼠和免疫抑制小鼠免疫器官指数的影响  65-66
    5.3.2 翡翠贻贝糖胺聚糖对荷 S180 肉瘤小鼠免疫器官指数的影响  66
    5.3.3 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响  66-68
    5.3.4 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响  68-70
    5.3.5 翡翠贻贝糖胺聚糖对NK 细胞活性的影响  70
  5.4 讨论  70-73
    5.4.1 翡翠贻贝糖胺聚糖对正常小鼠和免疫抑制小鼠免疫器官指数的影响  70-71
    5.4.2 翡翠贻贝糖胺聚糖对荷 S180 肉瘤小鼠免疫器官指数的影响  71
    5.4.3 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响  71-72
    5.4.4 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响  72-73
    5.4.5 翡翠贻贝糖胺聚糖对NK 细胞活性的影响  73
  5.5 本章小结  73-75
6 总结论  75-79
  6.1 本论文的主要研究成果  75-77
  6.2 本论文的欠缺之处及今后的工作设想  77-79
    6.2.1 欠缺之处  77
    6.2.2 今后工作设想  77-79
参考文献  79-87
致谢  87-88
导师简介  88-89
作者简历  89

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