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高致病性PRRSV在仔猪体内动态分布和体外增殖特性的研究

作　者: 荣福龙
导　师: 孙刚
学　校: 东北农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: PRRSV变异株荧光定量PCR 抗原动态分布病理变化体外增殖规律
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 71次
引　用: 1次
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内容摘要

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪及育肥猪呼吸道疾病为主要特征猪的重要传染病。1987年该病首先发现于美国,随后流行于北美和欧洲各养猪国家,并迅速蔓延到世界各地。2006年我国暴发了“猪高热病”,目前研究结果表明该病的主要病原是高致病性PRRSV变异毒株,并伴有多种病原体混合感染,以高热为主要特征。该病自1987年发现以来已经给全世界的养猪业带来了巨大的经济损失。为进一步了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株(HuN4株)在体内的动态变化规律和分布特点,探讨病毒对仔猪的器官组织的嗜性,本研究用HuN4株(强毒株)和其HuN4-F65株(细胞传代致弱毒株)接种40日龄健康仔猪,分别在其接种后1、3、5、7、10、14、21和28d各剖杀2头,并应用已建立的荧光定量PCR方法对脑、扁桃体、颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、心脏、脾脏、肾脏、肺脏、肝脏、胃和十二指肠等组织及血清中的PRRSV进行定量检测。结果表明,接种后HuN4组各器官病毒载量明显高于HuN4-F65组(约2个数量级),病毒载量高峰期出现在接种后7d,随后呈下降的趋势。HuN4株在仔猪体内广泛分布,在21d的试验期内持续存在,并且各器官的病毒载量呈正态分布规律;而HuN4-F65株在血清中病毒载量较低,并且集中在单核巨噬细胞相对密集的扁桃体和颌下淋巴结,与HuN4株主要嗜性器官肺脏相比发生了改变。此外,本实验还通过HE染色的方法研究了PRRSV变异株接种仔猪后引起的组织病理学变化,并初步探讨仔猪体内各器官的病毒载量与病理变化的关系。结果发现HuN4组各器官病理变化明显,而HuN4-F65组较轻微,另外HuN4组各器官病毒载量与病理变化存在一定的相关性,HuN4-F65组中扁桃体、淋巴结和脾脏的病毒载量与病理变化存在一定的相关性,而其他器官的相关性较差。利用荧光定量PCR方法研究HuN4株和HuN4-F65株在体外不同细胞的增殖规律,发现HuN4株和HuN4-F65株都可以在Marc-145细胞内复制,其中HuN4-F65株的增殖效率最高。对于PAM而言,HuN4株对其有较好的嗜性,而HuN4-F65株在PAM内增殖幅度小。HuN4株和HuN4-F65株感染PIEC后,病毒在细胞内均无明显增殖。

全文目录

中文摘要  8-9
英文摘要  9-11
1 引言  11-24
  1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述  11-21
    1.1.1 病原学  11-12
    1.1.2 PRRSV 分子生物学特点  12-15
    1.1.3 流行病学及临床症状  15-17
    1.1.4 发病机制与病理组织学变化  17-19
    1.1.5 PRRSV 诊断方法的研究现状  19-21
    1.1.6 高致病性PRRS  21
  1.2 荧光定量PCR  21-23
    1.2.1 荧光定量PCR 技术的原理  21-22
    1.2.2 荧光定量PCR 技术的两种定量形式  22
    1.2.3 荧光定量PCR 技术的种类  22-23
    1.2.4 荧光定量PCR 技术在动物医学领域中的应用  23
  1.3 本试验的目的和意义  23-24
2 材料和方法  24-28
  2.1 荧光定量PCR 研究PRRSV 变异株在仔猪体内动态分布的材料和方法  24-25
    2.1.1 试验材料  24-25
    2.1.2 试验方法  25
  2.2 不同毒力PRRSV 变异株在体外增殖试验的材料和方法  25-28
    2.2.1 试验材料  25-26
    2.2.2 试验方法  26-28
3 结果与分析  28-49
  3.1 不同毒力PRRSV 变异株在仔猪体内动态分布  28-45
    3.1.1 临床症状  28
    3.1.2 剖检变化  28-29
    3.1.3 PRRSV 感染仔猪后PRRSV 在各器官及血清中的动态分布规律  29-36
    3.1.4 组织病理学变化  36-45
  3.2 不同毒力PRRSV 变异株在体外增殖试验的结果  45-49
    3.2.1 细胞病变评价结果  45-47
    3.2.2 荧光定量PCR 检测结果  47-49
4 讨论  49-53
  4.1 不同毒力PRRSV 变异株在仔猪体内复制动态变化规律  49-50
  4.2 不同毒力PRRSV 变异株接种仔猪后组织病理学评价  50-51
  4.3 不同毒力PRRSV 变异株在体外增殖规律  51-53
5 结论  53-54
致谢  54-55
参考文献  55-63
附录  63-72
攻读硕士期间发表的学术论文  72

高致病性PRRSV在仔猪体内动态分布和体外增殖特性的研究

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