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杂交鹅掌楸悬浮培养体细胞的微丝骨架变化

作　者: 赵艳
导　师: 施季森
学　校: 南京林业大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 杂交鹅掌楸 体细胞胚胎发生 悬浮培养 微丝骨架
分类号: Q245
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 68次
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内容摘要


植物细胞悬浮培养可产生基因型相对一致、分散性良好、快速分裂的细胞群,且容易加入诱导物质,容易检测和评价信号中间物质对各方面的调控作用,一个良好的悬浮细胞系可以在短时间内大量繁殖。基于悬浮培养的这些优点,以杂交鹅掌楸体细胞悬浮培养物为实验材料,进行细胞微丝骨架观察,并诱导悬浮培养物产生体胚。本实验采用酶解法破坏杂交鹅掌楸体细胞细胞壁,利用可以与微丝特异结合的荧光染料鬼笔环肽(TRITC-phalloidin),辅以激光共聚焦扫描显微镜技术(Laser confocal scanning microscopy, LCSM),经反复实验得出鬼笔环肽标记杂交鹅掌楸体细胞的最优体系,且清晰的显示了杂交鹅掌楸悬浮体细胞中微丝骨架的分布格局:丰富的微丝束,形成密集而且复杂的网络结构。悬浮体细胞培养1-12天内,微丝骨架在1-7天内呈清晰复杂的网架结构,而在后期会出现模糊,并且网架结构简单。这与细胞分裂增殖的规律很相似,说明细胞增殖与细胞骨架结构密切相关。基于绿色荧光蛋白(GFP)稳定,灵敏度高且无生物毒性等优点,被广泛用于基因转入表达与蛋白质的定位。因此我们从野生拟南芥中克隆出能特异表达微丝肌动蛋白的ABD2基因,构建了PBI121-ABD2-GFP载体,以期能在后续的研究中起到作用。

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中图分类: > 生物科学 > 细胞生物学 > 细胞形态学 > 细胞骨架
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