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p55PIK慢病毒表达载体的构建及鉴定
作 者: 曹战江
导 师: 曹志新
学 校: 华中科技大学
专 业: 普通外科学
关键词: 慢病毒 p55PIK 增殖
分类号: R373
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 13次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
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目的:构建p55PIK慢病毒表达载体Lenti-p55PIK,并观察高表达p55PIK对肿瘤细胞增殖的影响。方法:用PCR的方法扩增得到人p55PIK编码区全长片段,通过酶切、连接、转化和质粒提取等步骤得到重组慢病毒表达质粒p55PIK-pCDF,并进行酶切和基因测序鉴定。脂质体转染法在293FT细胞中转染pCDF-p55PIK、pFIV与pVSVG,包装得到可以产生绿色荧光的慢病毒Lenti-p55PIK。将慢病毒Lenti-p55PIK感染肿瘤细胞,用Western blot法检测p55PIK的表达,用流式细胞技术检测增殖细胞相关抗原Ki67的表达,观察p55PIK对细胞增殖的影响。结果:PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,得到1400bp左右的条带,大小与p55PIK编码基因序列大小一致。重组p55PIK-pCDF质粒进行酶切初步鉴定,证明了p55PIK编码基因序列插入到了pCDF质粒中。经构建好的质粒经酶切初步鉴定后送测序,结果完全符合p55PIK编码基因序列。将pCDF-p55PIK、pFIV与pVSVG转染293FT细胞进行包装,荧光显微镜下可以观察细胞包装效率,裂解细胞得到的病毒Lenti-p55PIK。将病毒感染肿瘤细胞,在荧光显微镜下观察到细胞内显示的绿色荧光,Western blot法检测p55PIK的表达,Lenti-p55PIK组显著高于空病毒组和空白对照组,(P<0.01),流式细胞技术检测增殖细胞相关抗原Ki67的表达,结果显示Lenti-p55PIK组显著高于空病毒组和空白对照组,(P<0.05)。结论:成功构建了人p55PIK慢病毒表达载体Lenti-p55PIK,其能够在肿瘤细胞中高表达人p55PIK蛋白,而且观察到p55PIK促进增殖细胞相关抗原Ki67的表达。
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全文目录
中文摘要 5-6
英文摘要 6-7
前言 7-9
材料与方法 9-17
结果 17-20
讨论 20-22
参考文献 22-24
综述 24-39
参考文献 34-39
致谢 39
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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 人体病毒学（致病病毒）
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