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不同剂量百草枯染毒后大鼠急性肺、肝、肾损伤的观察

作　者: 姜凯丽
导　师: 张锡刚
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 中毒救治与重症医学
关键词: 百草枯急性肺损伤二氯荧光素双醋酸盐氧自由基肝肾损伤
分类号: R595.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目目的:比较不同剂量百草枯(Paraquat PQ)染毒后大鼠肺、肝、肾组织的病理形态学(HE、TEM)变化及组织氧自由基含量变化,以判断氧自由基含量与肺、肝、肾损伤的关系,为确定氧自由基在PQ所致组织损伤中的作用提供理论依据。方方法:以我课题组此前所建的“PQ中毒致肺纤维化大鼠模型(即雄性Wistar大鼠,体重200±10g,PQ染毒剂量为25mg/kg,一次性腹腔注射,2周后大鼠肺纤维化发生率为90%以上)”为基础,选取低于肺纤维化大鼠模型组染毒剂量的两个染毒剂量组及高于肺纤维化大鼠模型组的两个染毒剂量组,共5个染毒剂量组,以及1个正常对照组为研究对象。具体方法为Wistar大鼠88只,随机分为6组,即A组、B组、C组、D组、E组、F组,A组为正常对照组,8只,不染毒,其余5组,每组16只,染毒剂量分别为15mg/kg、20 mg/kg、25 mg/kg、30 mg/kg、35 mg/kg,各组动物分别于染毒后4h(B1、C1、D1、E1、F1)、12h(B2、C2、D2、E2、F2)腹主动脉放血处死,每组各8只。处死后快速取大鼠肺、肝、肾组织。左肺大叶称取湿重,在80℃的烘箱里烘干后称干重,计算肺系数(包括肺含水量、湿肺/干肺、干肺/体比、湿肺/体比),应用SAS软件,t检验比较组间差别;取右肺上叶宽约0.5cm与二氯荧光素双醋酸盐(2’,7’- dichloro-dihydrofluorescein diacetate DCFH-DA)孵育15min后,行冰冻切片,在荧光显微镜下观察荧光强度,判断氧自由基的量;右肺第4叶取边缘约1mm×1mm×1mm大小肺组织用3%戊二醛固定行透射电镜检测;右肺2、3叶用10%中性福尔马林固定2天后,行HE检测。取肝上叶宽约0.5cm的肝组织与DCFH-DA孵育15min后,行冰冻切片,在荧光显微镜下观察荧光强度,判断氧自由基的量;取边缘1mm×1mm×1mm大小肝组织用3%戊二醛固定行透射电镜检测;取一叶肝用10%中性福尔马林固定2天后,行HE检测。左肾中间横断,取其一半与DCFH-DA孵育15min后,行冰冻切片,在荧光显微镜下观察荧光强度,判断氧自由基的量;左肾另一半取肾皮质1mm×1mm×1mm大小肾组织用3%戊二醛固定行透射电镜检测;取右肾用10%中性福尔马林固定2天后,行HE检测。结结果:与正常对照组比较,B1、C1、D1、E1、F1、B2、C2、D2组大鼠肺系数无明显变化,E2、F2组肺系数明显增高,P<0.05。随PQ染毒剂量的升高,与DCFH-DA孵育的肺、肝、肾组织冰冻切片的荧光强度逐渐增强。病理切片(HE染色):B1、C1、D1、E1、F1组肺泡腔内有蛋白水肿液的渗出、透明膜形成,白细胞浸润不明显,肺泡间隔仍为单层细胞,略增厚,不同染毒剂量组渗出液量差别不显著,B2、C2、D2、E2、F2组肺内白细胞浸润明显,肺出血、毛细血管的扩张充血,内皮细胞肿胀均明显,且随染毒剂量的增加,肺泡炎症浸润明显加重,E2及F2组肺泡腔几乎消失,肺出血明显。透射电镜可见染毒剂量越高肺组织亚细胞结构损伤越重。A组肝组织结果基本正常,细胞器结构无异常,染毒组细胞器以水肿为主,4h和12h内肝细胞损伤差别不明显。A组肾组织结构基本正常,超微结构无异常,染毒后出现空泡变性等损伤,损伤以水肿为主。而4h和12h内肾组织损伤差别不明显。结结论:PQ中毒后大鼠肺、肝、肾均有损伤,损伤程度与染毒剂量相关,染毒剂量越高,组织的损伤越重。染毒剂量越大组织中的氧自由基含量越高,肺、肝、肾组织损伤程度越重,呈正相关。组织损伤以肺损伤为主,染毒后4h可见渗出性病变,肺系数没有变化,而12h渗出性病变及炎症浸润均明显,高剂量组肺系数明显增高,肝、肾未表现出明显差别。

全文目录

缩略词表  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-19
第一章不同剂量百草枯染毒大鼠急性肺损伤的观察  19-30
  第一节实验材料与方法  19-20
  第二节实验结果  20-28
  第三节小结  28-30
第二章不同剂量百草枯染毒大鼠肝损伤的观察  30-37
  第一节实验材料与方法  30
  第二节实验结果  30-36
  第三节小结  36-37
第三章不同剂量百草枯染毒大鼠肾损伤的观察  37-45
  第一节实验材料与方法  37
  第二节实验结果  37-43
  第三节小结  43-45
第四章讨论  45-49
第五章实验结论  49-50
参考文献  50-53
发表论文  53-60
文献综述  60-66
致谢  66-67
个人简历  67

不同剂量百草枯染毒后大鼠急性肺、肝、肾损伤的观察

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