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胃癌及其淋巴结转移灶NF-κB表达与肿瘤多药耐药性关系的研究

作　者: 耿建磊
导　师: 李勇；范立侨
学　校: 河北医科大学
专　业: 外科学
关键词: 胃肿瘤 转移淋巴结 核转录因子-кB 化疗药敏性 多药耐药相关因子
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:胃癌是一种严重威胁人类健康的常见肿瘤,死亡率在我国居恶性肿瘤之首。其转移和复发是患者的主要死亡原因,也是影响临床治疗和预后的主要因素。到目前为止,手术治疗仍是主要的治疗手段。但大多数患者在明确诊断时已是中晚期,虽经手术切除、化疗等综合治疗,效果仍不能令人满意。合理的化疗有助于改善胃癌病人的临床疗效和提高生存率,但目前临床影响疗效的关键问题之一是肿瘤的多药耐药性(Multiple drug resistance,MDR)的存在。MDR包括原发性(先天性)耐药(Natural MDR)和继发性(获得性)耐药(Acquired MDR):原发性耐药是肿瘤细胞固有的对化疗药物不敏感,故首次使用化疗药物就产生耐药;继发性耐药是指一种药物作用于肿瘤细胞使之产生耐药性后,该肿瘤细胞逐渐对未接触过的、结构无关、作用靶点和机制不同的多种抗肿瘤药物也具有交叉耐药性。肿瘤MDR的机制异常复杂,是多基因、多因素综合作用的结果,MDR的形成机制已成为国内外学者研究的热点之一。肿瘤细胞耐药的分子机制涉及癌基因和抑癌基因的表达异常、DNA损伤修复能力改变及多药耐药相关蛋白异常表达等多个方面。瘤细胞的MDR现象是肿瘤治疗中出现的最常见和最棘手的问题,要提高恶性肿瘤化疗的有效性,必须深入研究MDR产生的机制并寻求有效的逆转对策。核转录因子-кB(Nucleartranscription factor kappa B,NF-кB)是一种在体内广泛存在的核转录蛋白,除参与炎症、免疫和应激等诸多生物学过程中的基因调节,还在细胞增殖细胞凋亡细胞因子生成和癌基因表达等方面起重要作用,NF-κB主要通过对相关基因的转录调控,推进细胞周期演进并抑制凋亡,从而在细胞癌变过程中发挥重要作用。研究表明,NF-κB在胃癌的浸润转移中发挥重要调节作用,其激活与肿瘤的发生、发展及转移有关,是胃癌的研究热点之一。目前已经证明NF-κB是一种细胞保护性因子,可上调“保护性或抗凋亡蛋白”,在肿瘤发生过程中可提高肿瘤细胞生存率,抑制细胞凋亡,使肿瘤细胞产生耐药。所以NF-κB与MDR有着密切的关系。本课题研究以进展期胃癌原发灶(Primary tumor, PT)、相应淋巴结转移灶(Lymph node metastases , NLMs)为研究对象,取手术胃癌PT和NLMs组织,通过应用组织芯片技术(Tissue microarry)、免疫组织化学(Immuno- histochemistry SP)法和逆转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription poly- merase chain reaction, RT-PCR)及四氮唑蓝法(MTT)技术,对胃癌原发灶、相应淋巴结转移灶进行分析,检测两组织中NF-кB、MDR相关因子MDR1/P-gp、Bcl-2/Bax的蛋白水平表达;检测胃癌PT和NLMs中NF-кB、MDR相关因子(P-gp、Bcl-2/Bax)在mRNA水平表达,并与蛋白水平的MDR相关因子表达程度进行比较;同时以四氮唑蓝法(MTT)法测定常用化疗药物(氟尿嘧啶5-FU、长春新碱VCR、紫杉醇PTX、奥沙利铂OXA、表阿霉素eADM)对胃癌原发灶、相应淋巴结转移灶肿瘤细胞的抑制情况,探讨NF-кB在胃癌淋巴结转移灶MDR中的作用及机制。方法:选取河北医科大学第四医院外三科2008年2月~2008年8月行手术切除的伴有淋巴结转移的胃癌患者共66例,取胃癌原发灶及淋巴结转移灶(病理证实)作为研究对象。制作组织芯片,采用SP方法NF-κB p65、MDR相关因子(P-gp、Bcl-2/Bax)在胃癌原发灶和淋巴结转移灶中的蛋白表达情况;采用RT-PCR方法测定其中32例胃癌原发灶和淋巴结转移灶中NF-κB p65、MDR相关因子mRNA水平表达情况;采用MTT法检测胃癌化疗常用药物(5-FU、VCR、PTX、OXA、eADM)对三组细胞的体外抑制情况。所有实验数据用SPSS 12.0统计软件处理,P<0.05时认为差异具有显著性。结果:1.胃癌原发灶与淋巴结转移灶NF-κB p65、MDR相关因子(P-gp、Bcl-2、Bax)mRNA表达NF-κB p65、P-gp、Bcl-2在转移灶中的mRNA水平均高于原发灶(t=-14.285;t=-9.014;t=-7.318;均P<0.01),而Bax mRNA水平在转移灶中则水平降低(t=7.595;P<0.01);在原发灶与转移淋巴结间NF-κB p65 mRNA表达具有明显相关性(r=0.543,P<0.05);在原发灶中,NF-κB p65与P-gp之间表达强度具有正相关性(r=0.633,P<0.01),NF-κB p65与Bax、Bcl-2与Bax之间表达均具有负相关性(r=0.559,r=-0.723均P<0.05);在转移淋巴结中各因子表达均未见明显相关性。2.胃癌原发灶与淋巴结转移灶NF-κB p65、MDR相关因子(P-gp、Bcl-2、Bax)蛋白表达NF-κB p65、P-gp、Bax在转移灶中的表达程度明显高于原发灶(χ2=4.120,χ2 =4.400,χ2=4.130,均P<0.05),Bcl-2蛋白水平在转移灶与原灶中无明显差别(χ2=0.508,P>0.05);在胃癌原发灶及淋巴结转移灶中P-gp、Bcl-2、Bax表达均呈正相关(r=0.449, r=0.364, r=0.258,均P<0.05),NF-κB p65表达无相关性(r=0.155,P>0.05);在原发灶中,NF-κB p65与P-gp之间表达具有正相关性(r=0.342,P<0.05),NF-κB p65与Bax、Bcl-2与Bax之间表达均具有负相关性(r=-0.395,r=-0.541,均P<0.05);在转移淋巴结中各因子表达均未见明显相关性。3.胃癌原发灶、淋巴结转移灶之间5-FU、VCR、PTX、eADM、OXA化疗药物敏感性比较胃癌原发灶与转移灶的化疗药物抑制率比较,VCR对转移淋巴结肿瘤细胞抑制率均明显低于原发灶(t=4.317, P<0.05),而5-FU、PTX、OXA、eADM对肿瘤细胞抑制率在转移灶、原发灶之间差异无统计学意义(t= -0.696, t=-1.122, t=-1.097, t=1.912,均P>0.05)4.胃癌原发灶与淋巴结转移灶NF-κB p65、P-gp、Bcl-2、Bax蛋白表达与肿瘤细胞体外化疗药敏性的关系在原发灶中,NF-κB p65强表达组的5-FU、PTX对肿瘤细胞的抑制率明显低于弱表达组(t=2.939, t=3.082,均P<0.05);P-gp强表达组的5-FU、PTX、OXA对肿瘤细胞的抑制率明显低于弱表达组(t=3.455, t=2.440, t=2.820,均P<0.05);Bcl-2强表达时,5-FU、PTX、eADM对肿瘤细胞的抑制率明显低于弱表达组(t=2.130, t=2.447, t=5.518,均P<0.05);Bax强表达组的5-FU、OXA、eADM对肿瘤细胞的抑制率明显高于弱表达组(t=-3.639, t=-2.879, t=-3.231,均P<0.05)。在淋巴结转移灶中,NF-κB p65强表达时5-FU对肿瘤细胞的抑制率明显下降(t=2.306, P<0.05);P-gp强表达组的5-FU、PTX、OXA对肿瘤细胞的抑制率明显低于弱表达组(t=2.356,t=2.222,t=2.159,均P<0.05);Bcl-2强表达组中5-FU和PTX 2种药物对肿瘤细胞的抑制率低于弱表达组(t=3.836, t=2.771,均P<0.05);Bax强表达组的5-FU、OXA、eADM对肿瘤细胞的抑制率明显高于弱表达组(t=-3.416, t=-2.925, t=-2.331,均P<0.05)。结论:1. NF-кB p65、P-gp、Bcl-2在淋巴结转移灶中mRNA水平的表达明显高于胃癌原灶,以上因子表明胃癌原发灶与淋巴结转移灶在基因转录水平,已发生了变化,这种变化可能是最终导致MDR表型变化的根本原因。提示NF-кB p65与MDR1/P-gp可能存在调控关系;NF-κB与凋亡调控途径的关系也是如此。NF-кB p65通路的激活可能是造成肿瘤多药耐药的原因之一,NF-кB p65在胃癌多药耐药中起一定的作用;2. NF-кB p65、P-gp、Bax在淋巴结转移灶中蛋白表达水平明显高于胃癌原灶,表明其可能参与肿瘤的原发性多药耐药,并为探讨肿瘤原发性多药耐药的作用机制提供依据;在蛋白水平也表明NF-кB p65与胃癌MDR1/P-gp有关, NF-κB与凋亡调控途径也有类似结果。NF-кB p65通路激活在胃癌MDR中起一定的作用;3.胃癌原发灶、淋巴结转移灶部分耐药性存在差异,淋巴结转移灶有更强耐药性趋势,提示胃癌淋巴结转移灶MDR与原发灶不同,以原发灶耐药结果预测淋巴结转移灶化疗药敏性不够准确;4. NF-кB p65、P-gp、Bcl-2、Bax各自表达程度仅与部分化疗药物耐药性发生影响,评价胃癌MDR应从多因素、多途径进行。总之,对胃癌原发灶、淋巴结转移灶NF-κB p65的检测证实该因子参与了胃癌MDR,并在转移过程中发生了异质性变化,对胃癌MDR的预测有一定的价值。通过评价其在胃癌MDR,胃癌MDR表型变化是多种因素、多途径、多种机制共同参与的网络化调节的结果,可以认为单纯检测胃癌一种或几种MDR相关因子的表达仅能反映部分多药耐药相关药物的耐药情况,不能准确预测实际临床并反映化疗药敏性,以及肿瘤多药耐药的异质性。肿瘤的MDR与转移之间关系的研究尚处在初级阶段,进一步研究胃癌转移灶MDR的异质性与化疗药敏性关系,对开展针对转移灶的个体化化疗具有重要临床意义。

全文目录


中文摘要  4-8
英文摘要  8-13
研究论文 胃癌及其淋巴结转移灶NF-κB表达与肿瘤多药耐药性关系的研究  13-48
  前言  13-14
  材料与方法  14-23
  结果  23-26
  附图  26-36
  附表  36-40
  讨论  40-44
  结论  44-45
  参考文献  45-48
综述 肿瘤 NF-кB 表达及其与 MDR 关系研究进展  48-69
致谢  69-70
个人简历  70

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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