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春剑花梗离体培养褐化防止技术及机理研究

作　者: 施琴
导　师: 王永清
学　校: 四川农业大学
专　业: 园林植物与观赏园艺
关键词: 春剑‘翠仙’ 花梗组培褐化 PPO POD 总酚含量
分类号: S682.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本研究以春剑‘翠仙’花梗为外植体,采用不同的处理,在不同的时间段内测定PPO活性、POD活性以及总酚含量的变化,研究它们在组培过程中与褐化的关系,初步探索褐化机理,为控制春剑花梗离体培养褐化问题奠定基础。主要研究结果如下：1)春剑花梗离体培养的最佳取材时机为2月份,褐化率最低为20%；外植体的PPO活性在接种后第7天达到第一个峰值,之后活性下降,在接种后第21天时达到第二个峰值,两峰值间相差3个酶活力单位。2)经过暗培养的外植体褐化率最低,比对照低15个百分点,二者间差异达到极显著水平。3)用3g／L的抗坏血酸或柠檬酸溶液浸泡外植体后,褐化率均为20%,与最高褐化率相差50个百分点。其中,抗坏血酸的防褐效果最好,二者在褐化率最低处理中同期比较相差5个百分点。4)在培养基中添加抗氧化剂或吸附剂时,外植体的PPO活性、POD活性变化趋势不一致；酶活性并未随着时间延长而持续增加或者减少。抗氧化剂添加方面,柠檬酸浓度和抗坏血酸浓度均为2g／L时,其褐化率最低,分别为35%和30%；PPO活性也最低,在活性分别达到第一个峰值时不同浓度处理同期比较,柠檬酸和抗坏血酸分别相差0.2和0.5个酶活性单位；同时,POD活性也是最低值,在第一个峰值处不同处理同期比较,分别相差15和12个酶活性单位。5)切口封闭温度不同,外植体的褐化率、酶活性差异较大,随着切口封闭温度升高(45℃,65℃,85℃),褐化率、酶活性逐渐降低。当切口温度为45℃外植体褐化率最低,到接种第28天时褐化率为零；此时PPO活性、POD活性最高,与褐化率最高处理相比,PPO活性相差近2个酶活力单位,POD相差近15个酶活力单位。而总酚含量并未随着温度的升高而出现明显的差异。6)当基本培养基为1／4MS时,外植体的褐化率最低,为15%；当基本培养基为MS时,外植体的褐化率最高,为35%。说明含有低无机盐和低氨态氮的培养基可以减轻外植体的褐化。此外,培养基中较高的细胞分裂素与生长素的比例,可以减轻褐化。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-9
1 文献综述  9-18
  1.1 国内外兰花组培研究概况  10
  1.2 国兰花梗组织培养研究  10-11
  1.3 褐化的概念及机理  11-14
    1.3.1 褐化现象  11
    1.3.2 褐化机理  11-14
  1.4 预防褐化的措施  14-17
    1.4.1 外植体或培养材料的选择和处理  14-15
    1.4.2 选择适宜的基本培养基  15
    1.4.3 培养基中添加防褐化剂  15-16
    1.4.4 其他  16-17
  1.5 国兰组织培养中褐化问题的研究进展  17-18
2 本研究的目的与意义和主要内容  18-19
  2.1 目的意义  18-19
  2.2 主要内容  19
3 实验方法  19-24
  3.1 实验材料  19
  3.2 主要仪器及药品  19
  3.3 实验方法  19-24
    3.3.1 外植体准备  19-20
    3.3.2 外植体取材时间对褐化的影响  20
    3.3.3 暗培养对褐化的影响  20
    3.3.4 不同抗氧化剂对褐化的影响  20
    3.3.5 不同吸附剂对褐化的影响  20
    3.3.6 浸泡外植体的方法对褐化的影响  20-21
    3.3.7 切口封闭温度对褐化的影响  21
    3.3.8 基本培养基和生长调节物质对褐化的影响  21
    3.3.9 酚类物质含量测定  21-23
    3.3.10 PPO活性的测定  23
    3.3.11 POD活性测定  23-24
  3.4 实验结果的观察项目和统计分析  24
4 结果与分析  24-44
  4.1 不同外植体取材时间对春剑组培外植体褐化的影响  24-26
    4.1.1 不同取材时间对褐化率的影响  24
    4.1.2 不同取材时间对PPO活性的影响  24-26
    4.1.3 不同取材时间对POD活性的影响  26
  4.2 暗培养外植体褐化的影响  26-29
    4.2.1 暗培养对褐化率的影响  26-27
    4.2.2 黑暗预处理对PPO活性的影响  27
    4.2.3 暗培养对POD活性的影响  27-28
    4.2.4 暗培养对总酚含量的影响  28-29
  4.3 不同抗氧化剂处理对春剑组培外植体褐化的影响  29-33
    4.3.1 不同抗氧化剂处理对褐化率的影响  29-30
    4.3.2 不同抗氧化剂处理对PPO活性的影响  30
    4.3.3 不同抗氧化剂处理对POD活性的影响  30-32
    4.3.4 不同抗氧化剂处理对总酚含量的影响  32-33
  4.4 不同吸附剂处理对春剑组培外植体褐化的影响  33-35
    4.4.1 不同吸附剂对褐化率的影响  33-34
    4.4.2 不同吸附剂对PPO活性的影响  34
    4.4.3 不同吸附剂对POD活性的影响  34-35
  4.5 浸泡外植体对春剑组培外植体褐化的影响  35-39
    4.5.1 浸泡外植体对褐化率的影响  35-36
    4.5.2 浸泡外植体对PPO活性的影响  36-37
    4.5.3 浸泡外植体对POD活性的影响  37-38
    4.5.4 抗氧化剂浸泡外植体对总酚含量的影响  38-39
  4.6 切口封闭温度对外植体褐化的影响  39-42
    4.6.1 切口封闭温度对褐化率的影响  39
    4.6.2 切口封闭处理对PPO活性的影响  39-40
    4.6.3 切口封闭温度对POD活性的影响  40-41
    4.6.4 切口封闭温度对总酚含量的影响  41-42
  4.7 不同培养基和植物生长调节物质对外植体褐化的影响  42-44
    4.7.1 不同培养基和生长调节物质对褐化率的影响  42
    4.7.2 不同培养基和生长调节物质对PPO活性的影响  42
    4.7.3 不同培养基和植物生长调节物质对POD活性的影响  42-44
    4.7.4 不同培养基和植物生长调节物质对总酚含量的影响  44
5 讨论  44-47
  5.1 不同外植体取材时间对褐化、PPO、POD和总酚的影响  44-45
  5.2 暗培养对褐化、PPO、POD和总酚的影响  45
  5.3 不同抗氧化剂处理对褐化、PPO、POD和总酚的影响  45
  5.4 不同吸附剂处理中褐化、PPO、POD和总酚的影响  45-46
  5.5 浸泡外植体对褐化、PPO、POD和总酚的影响  46
  5.6 切口封闭温度对褐化、PPO、POD和总酚的影响  46
  5.7 不同培养基和生长调节物质对褐化、PPO、POD和总酚的影响  46-47
  5.8 褐化与PPO、POD和总酚的关系  47
6 结论  47
7 问题和下一步建议  47-49
参考文献  49-54
致谢  54-55
图版  55

春剑花梗离体培养褐化防止技术及机理研究

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