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谷胱甘肽转硫酶介导白血病细胞对化疗和生物治疗剂的抗性机理研究

作 者: 林蓉蓉
导 师: 陈汉春;张殿政
学 校: 中南大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 慢性粒细胞白血病 干扰素 羟基脲 GSTPi
分类号: R733.72
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要


慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia, CML)是一类血液系统恶性肿瘤。羟基脲(hydroxyurea, HU)是CML的首选化疗药物之一;干扰素-a(interferon-alpha, IFN-α)是造血系统恶性肿瘤和淋巴瘤的有效生物治疗剂;但CML细胞对二者均呈现抗性。谷胱甘肽转硫酶(glutathione S-transferases Pi, GSTPi)是Ⅱ相药物代谢酶成员,可能参与了CML细胞对化疗和/或生物治疗剂的抗性形成过程。目的:本课题是以CML细胞株(K562、KT-1/A3和KT-1/A3R)细胞为实验模型,研究HU、IFN-α或二者联合对CML细胞增殖、凋亡的影响,分析经HU、IFN-α单独或联合作用前、后的CML细胞的GSTPi的表达差异,探讨GSTPi在CML细胞对化疗和/或生物治疗剂的抗性形成过程中的作用及其可能机制。方法:1.细胞计数分析K562、KT-1/A3和KT-1/A3R细胞对照组和加药组的细胞生长状态,绘制细胞生长曲线;2.MTT法检测K562、KT-1/A3和KT-1/A3R细胞对照组和药物作用48小时后的生长抑制率;3.流式细胞术检测K562、KT-1/A3和KT-1/A3R细胞周期和细胞凋亡率;4. RT-PCR及Western-blotting检测K562、KT-1/A3和KT-1/A3R细胞的对照组和加药作用48小时后的GSTPi表达水平。结果:1.HU可以抑制K562、KT-1/A3和KT-1/A3R细胞的增殖和促进其凋亡,与对照组比较均具有统计学显著性(P<0.01);2.HU联合IFN-a可以协同抑制K562、KT-1/A3和KT-1/A3R细胞增殖,并诱导CML细胞凋亡,与单独用药相比,联合用药更能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05); 3. RT-PCR结果表明,在HU作用下,K562、KT-1/A3R细胞与对照组相比,GSTPi基因表达显著下调(P<0.05);4. Western blotting结果表明,HU可下调K562、KT-1/A3R细胞的GSTPi的蛋白质水平(P<0.05)。结论:1.HU及HU联合IFN-α均能显著抑制CML细胞增殖,并诱导细胞凋亡;HU联合IFN-α比二者单独使用对CML细胞增殖的抑制效应及诱导CML细胞凋亡的效应更加明显;2. GSTPi的表达水平与K562、KT-1/A3R的干扰素耐药性有关,HU可下调GSTPi表达水平;3.K562、KT-1/A3R细胞对IFN-α耐药,而HU或HU联合IFN-α可缓解K562、KT-1/A3R细胞对IFN-α的抗性,而且联合用药后可以协同抑制K562、KT-1/A3R细胞增殖,促进其凋亡。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
英文缩略词表  10-11
第一章 前言  11-13
  1.1 慢性粒细胞白血病形成机制  11
  1.2 慢性粒细胞白血病的治疗  11
  1.3 GSTPi与CML的耐药性及细胞凋亡  11-12
  1.4 GSTPi在CML细胞中的表达  12
  1.5 本文选题思路  12-13
第二章 材料与方法  13-21
  1. 材料  13-14
    1.1 主要试剂  13
    1.2 主要仪器和设备  13-14
  2. 方法  14-21
    2.1 细胞计数法绘制CML细胞生长曲线  14
    2.2 MTT实验检测CML细胞生长抑制率  14-15
    2.3 RT-PCR分析GSTPi基因表达水平  15-17
    2.4 流式细胞仪分析CML细胞凋亡  17
    2.5 Western blot检测GSTPi蛋白质表达水平  17-20
    2.6 统计学分析  20-21
第三章 结果  21-33
  1. 羟基脲干扰素-α对CML细胞生长的影响  21-23
  2. 加药作用48小时后CML细胞(KT-1/A3)形态学改变  23
  3. MTT实验检测药物作用48小时CML细胞的增殖抑制结果  23-24
  4. 流式细胞术检测加药48小时后CML细胞凋亡状态  24-27
  5. 药物作用48小时后CML细胞的GSTPi mRNA水平分析  27-29
  6. Western blotting验证GSTPi蛋白质表达差异  29-33
第四章 讨论  33-36
第五章 结论  36-37
参考文献  37-42
综述  42-50
  慢性粒细胞白血病的治疗进展  42-50
致谢  50-51
攻读硕士学位期间的学术成绩  51

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病 > 慢性白血病
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