学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

黄瓜花叶病毒M和Fny株系假重组体在系统侵染的烟草中的基因表达分析

作　者: 陈玲娜
导　师: 朱水芳；高必达
学　校: 湖南农业大学
专　业: 生物安全与检疫
关键词: 黄瓜花叶病毒侵染性克隆假重组体实时荧光定量PCR 恢复现象
分类号: S432.41
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 22次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

黄瓜花叶病毒(CMV),世界普遍发生,侵染数百种植物,经济意义重大。本研究采用侵染性克隆、病毒假重组和实时荧光PCR等技术,对CMV致病与恢复机理进行了初步探索。克隆测定了CMV-M株系全基因组RNA1、RNA2和RNA3序列,并克隆到p UC18载体,分别得到全长cDNA克隆pM1、pM2和pM3。用CMV-Fny和CMV-M (RNA2和RNA3)全长cDNA克隆体外转录RNA进行假重组,成功构建3个具有侵染活性的假重组病毒(F1M3F3、F1F2M3、F1M2M3)。在白肋烟上分别产生坏死环斑、轻微绿斑驳、明脉、黄白化、叶尖线性化等症状。根据假重组型病毒与野生型病毒症状差异,初步判定：CP基因是诱导花叶症状的关键因子,CMV-Fny RNA2是诱导叶尖线性化的关键因子,CMV-M RNA2是诱导叶尖坏死斑关键因子。设计了CMV RNA1、RNA2、RNA3、RNA4特异检测引物和实时荧光定量PCR (FQ-PCR)探针,用FQ-PCR定量分析了CMV-Fny、CMV-M及其假重组体4种RNA的变化规律。结果表明：在接种15d时,发病叶片、恢复初期叶片中病毒RNA1、RNA2、RNA3浓度没有实质性差异,但恢复叶中的RNA4浓度相比下降5倍,说明RNA4和恢复机制有着更加直接的关系；接种30d,发病叶片、恢复初期叶片中病毒RNA浓度显著下降,其中恢复叶中RNA降解程度最为严重,RNA1、RNA2、RNA3、RNA4浓度分别下降了36、139、100、320倍,说明在恢复叶中存在一个更加强大的RNA降解机制。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-11
主要符号表  11-12
一引言  12-23
  1.1 植物病毒研究方法  12-16
    1.1.1 生物学研究方法  12
    1.1.2 电子显微镜技术和物理化学分析方法  12-13
    1.1.3 血清学/免疫学方法  13-14
    1.1.4 分子生物学技术  14-16
  1.2 黄瓜花叶病毒研究进展  16-21
    1.2.1 CMV特性  16-17
    1.2.2 CMV分类  17-18
    1.2.3 CMV传播途径  18-19
    1.2.4 CMV致病机制研究现状  19-20
    1.2.5 CMV恢复机制研究现状  20-21
  1.3 研究目的和意义  21
  1.4 主要研究内容  21-23
二材料和方法  23-30
  2.1 实验材料  23-24
    2.1.1 寄主材料  23
    2.1.2 CMV株系  23
    2.1.3 试剂  23
    2.1.4 引物和探针  23-24
  2.2 实验方法  24-30
    2.2.1 摩擦接种  24
    2.2.2 CMV-M病毒粒子提纯  24
    2.2.3 植物总RNA提取  24
    2.2.4 琼脂糖电泳  24
    2.2.5 cDNA合成与克隆  24-25
    2.2.6 PCR产物纯化回收  25-26
    2.2.7 T载体连接  26
    2.2.8 转化感受态细胞  26
    2.2.9 质粒提取  26
    2.2.10 挑菌测序及序列分析  26-27
    2.2.11 体外转录  27
    2.2.12 各重组体接种及其生物活性测定  27-30
三结果  30-44
  3.1 CMV-M侵染性克隆和假重组体构建  30-33
    3.1.1 CMV-M全长CDNA克隆和基因序列分析  30
    3.1.2 CMV-M全长CDNA克隆侵染性分析及假重组体构建  30-32
    3.1.3 假重组体接种后症状  32-33
  3.2 CMV-M基因表达时序变化监测  33-36
    3.2.1 CMV-M侵染烟草症状的时序变化  33-34
    3.2.2 标准曲线  34
    3.2.3 CMV-M病毒粒子时序变化检测  34-36
    3.2.4 CMV-M病毒基因组RNA时序变化检测  36
  3.3 CMV-FNY基因表达时序变化监测  36-38
    3.3.1 CMV-FNY侵染烟草症状  36-37
    3.3.2 CMV-FNY病毒粒子时序变化检测  37
    3.3.3 CMV-FNY基因组RNA时序变化检测  37-38
  3.4 F1F2M3基因表达时序变化监测  38-39
    3.4.1 F1F2M3侵染烟草症状  38
    3.4.2 F1F2M3病毒粒子时序变化检测  38
    3.4.3 F1F2M3基因组RNA时序变化检测  38-39
  3.5 F1M2M3基因表达时序变化监测  39-41
    3.5.1 F1M2M3侵染烟草症状  39
    3.5.2 F1M2M3病毒粒子时序变化检测  39-40
    3.5.3 F1M2M3基因组RNA时序变化检测  40-41
  3.6 假重组体F1M3F3基因表达时序变化监测  41-44
    3.6.1 F1M3F3侵染烟草症状  41-42
    3.6.2 F1M3F3病毒粒子时序变化检测  42
    3.6.3 F1M3F3基因组RNA时序变化检测  42-44
四结论和分析  44-52
  4.1 CMV-M RNA1侵染性克隆活性低的原因分析  44
  4.2 CMV各基因的功能分析  44-45
  4.3 症状发展与病毒粒子含量变化的相关性  45
  4.4 症状发展与病毒基因组RNA含量变化的相关性  45-48
    4.4.1 CMV-M野生型  46
    4.4.2 CMV-FNY野生型  46-47
    4.4.3 F1F2M3  47
    4.4.4 F1M2M3  47-48
  4.5 CMV-M、F1F2M3和F1M2M3症状发展差异分析  48
  4.6 CMV-M恢复现象的原因分析  48-49
  4.7 F1M3F3症状发展的原因分析  49-50
  4.8 总结  50-52
参考文献  52-55
致谢  55-56
附录  56-58
作者简历  58

黄瓜花叶病毒M和Fny株系假重组体在系统侵染的烟草中的基因表达分析

内容摘要

全文目录

相似论文