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海洋厌氧光合细菌多样性分析及活性物质研究
作 者: 赵辰燕
导 师: 穆军;张翼
学 校: 大连交通大学
专 业: 环境科学
关键词: 海洋厌氧光合细菌 抗卤虫活性 系统发育树 活性化合物
分类号: Q93
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要
随着陆生微生物在抗生素、酶、酶抑制剂和多糖等生物活性物质方面的大量开发和应用,寻找发现新的种属的微生物来开发新型微生物天然活性物质的难度越来越大,因此,世界各国把研究开发重点转向了前景更为广阔的海洋微生物资源,这成为海洋微生物开发的主要内容。作为海洋微生物资源开发的前提,海洋微生物多样性的研究得到了迅速发展,尤其是随着分子生物学技术的快速发展和计算机的普遍应用,可以在不经培养的条件下研究海洋微生物的多样性,使海洋微生物的研究进入了一个新的阶段。海洋厌氧细菌物种的多样性以及其参加代谢活动的酶系与海洋好氧微生物有较多的不同,其产生的次生代谢产物理论上也会有较大的差异,这为寻找结构新颖,作用独特的代谢产物提供了理论基础。本论文对分离自中国东海、渤海、黄海海域不同样品来源的58株海洋厌氧细菌进行了研究,考察了菌株的抗卤虫活性,其中32株细菌表现出显著的杀虫活性。同时对其中45株菌株进行了16S rDNA测序,序列结果提交GenBank收录,并进行了系统发育树构建,在基因水平上基本确立了其系统发育学地位,这些菌株分别属于梭状芽孢杆菌属(Clostridium)、海洋红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)、海洋红细菌属(Rhodobium)、小红卵菌属(Rhodovulum)以及海杆菌属(Marinobacter)。同时,对一株海洋红细菌的次生代谢产物进行了活性物质研究。经过正相硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶、反相硅胶柱和高效液相色谱(HPLC)的制备层析,得到1个纯化合物和多个活性组分。通过对纯化合物ZA3的1H谱、13C谱、DEPT、HMBC、COSY、质谱的解析,鉴定该化合物为2’-胸腺嘧啶脱氧核苷。
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全文目录
摘要 5-6 Abstract 6-10 第一章 绪论 10-21 1.1 引言 10 1.2 海洋微生物的多样性 10-13 1.2.1 海洋微生物的多样性 10-11 1.2.2 海洋光合细菌的多样性 11-13 1.3 海洋微生物活性物质研究进展 13-19 1.3.1 抗肿瘤活性物质 13-15 1.3.2 抗心血管疾病的活性物质 15 1.3.3 免疫调节剂 15-16 1.3.4 抗生素 16-18 1.3.5 其它应用 18-19 1.3.6 展望 19 1.4 课题的目的、意义及研究内容 19-21 第二章 海洋厌氧菌的分离 21-26 2.1 材料与设备 21-22 2.1.1 实验设备 21 2.1.2 实验试剂 21 2.1.3 实验材料 21 2.1.4 培养基 21-22 2.2 实验方法 22-23 2.2.1 菌株纯化 22 2.2.2 形态学观察及细胞染色 22-23 2.3 实验结果 23-24 2.3.1 菌株纯化结果 23-24 2.3.2 形态学特征 24 2.4 讨论 24-25 本章小结 25-26 第三章 活性菌株筛选 26-30 3.1 材料与设备 26 3.1.1 实验仪器及设备 26 3.1.2 实验材料 26 3.2 实验内容 26-27 3.2.1 粗提物的提取 26 3.2.2 卤虫卵的孵化 26-27 3.2.3 活性测定 27 3.3 实验结果 27-29 3.4 讨论 29 本章小结 29-30 第四章 海洋厌氧菌株系统发育学分析 30-38 4.1 材料与设备 30-31 4.1.1 实验设备 30 4.1.2 实验试剂 30 4.1.3 培养基与缓冲液 30-31 4.2 实验方法 31-33 4.2.1 海洋厌氧菌总DNA 提取 31 4.2.2 16S rDNA 扩增 31 4.2.3 转化克隆 31-32 4.2.4 系统发育树的构建 32-33 4.3 实验结果 33-36 4.3.1 16S rDNA 序列 33 4.3.2 系统发育树的构建 33-36 4.4 讨论 36-37 本章小结 37-38 第五章 代谢产物的分离纯化及结构鉴定 38-56 5.1 材料与设备 38-39 5.1.1 实验仪器及设备 38 5.1.2 实验药品与试剂 38 5.1.3 茴香醛显色剂配方 38-39 5.2 实验内容 39-41 5.2.1 菌株扩大培养及粗提物提取 39 5.2.2 活性追踪 39 5.2.3 分离条件的探索 39 5.2.4 正相硅胶柱层析分离 39-40 5.2.5 凝胶柱层析分离 40-41 5.2.6 制备板层析制备 41 5.2.7 HPLC 分析及制备 41 5.3 实验结果 41-53 5.3.1 粗提物质量及薄层层析结果 41-42 5.3.2 粗提物正相柱层析分离 42-43 5.3.3 15~#与17~#正相硅胶柱层析分离 43-45 5.3.4 17-5,17-9,17-10 凝胶柱分离 45 5.3.5 HPLC 分析及制备 45-46 5.3.6 化合物结构鉴定 46-52 5.3.7 7~#与8~#凝胶柱分离 52-53 5.3.8 7-2 正相硅胶柱分离 53 5.3.9 7-3 凝胶柱分离 53 5.3.10 薄层制备板制备 53 5.3.11 7-2-6 正相硅胶柱分离 53 5.4 讨论 53-54 本章小结 54-56 结论 56-57 参考文献 57-61 攻读硕士学位期间发表的学术论文 61-62 致谢 62-63
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中图分类: > 生物科学 > 微生物学
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