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丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸对肉鸡氨基酸谱的影响及相关酶活性的研究

作　者: 张勇
导　师: 邹思湘；马海田
学　校: 南京农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 丙酮酸肌酸丙酮酸肌酸 AA肉鸡氨基酸谱酶活性
分类号: S831.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

丙酮酸肌酸(creatine pyruvate, CrPyr)是一种新型多功能的营养素,兼具丙酮酸和肌酸的双重功能。丙酮酸肌酸的主要效应成分—丙酮酸和肌酸均为机体内重要的代谢中间产物,其对机体的能量代谢、脂肪代谢和蛋白质代谢均可能产生一定的影响。业已以证实CrPyr能够促进能量的产生和耐力的维持,提高运动能力,重建能量储备,保持健康状态,缩短疲劳后的恢复时间,帮助瘦弱机体体重恢复(增加肌肉重量)。目前,对于CrPyr的研究主要集中在运动生理学方面,其对家禽蛋白质代谢影响的研究鲜有报道。本文选用雄性Arbor Acres (AA)肉鸡为实验动物,研究外源性补充CrPyr对肉鸡组织中氨基酸谱及相关酶活性的影响,旨在为调控家禽蛋白质的沉积提供理论依据。1氨基酸反相高效液相色谱分离检测法的建立本研究以邻苯二甲醛(OPA)为衍生剂,柱前衍生,Waters Spherisorb ODS柱(4.6mm×250mm,5μm)分离,梯度洗脱,荧光检测,在35分钟内使15种混合氨基酸全部得到有效分离。结果显示,在5.20-333nmo1·L-1浓度范围内,氨基酸的峰面积与浓度呈现良好的线性关系,相关系数均在0.999-1之间。不同氨基酸测定的日内、日间精密度分别为2.32%—5.02%和4.20%—5.90%。最低检测限为1.2nmo1·L-1。研究结果说明,本方法具有操作简单、灵敏,线性和回归系数良好,可以作为定性或定量的依据。2丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸对肉鸡部分组织中氨基酸谱的影响本研究以400只21日龄AA肉鸡,随机分为4组,每组4个重复,每个重复25只。对照组(C组)饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加2%的丙酮酸(T-Ⅰ组),3%肌酸(T-Ⅱ组),5%丙酮酸肌酸(T-Ⅲ组)。饲养至42日时,各组每个重复分别随机宰杀4只,采血并分离血清,采集肝脏及腿肌组织样品,-20℃保存。采用邻二甲苯(OPA)柱前衍生反相高效液相色谱仪法(RP-HPLC)检测血清、腿肌、肝脏组织氨基酸含量的变化。在35分钟内血清、腿肌及肝脏组织中15种混合氨基酸全部得到有效分离检测。结果显示,丙酮酸、肌酸、丙酮酸肌酸均使肉鸡血清中Thr、Trp的含量极显著降低；丙酮酸、肌酸、丙酮酸肌酸均能够能显著升高腿肌中Arg和Val的含量;丙酮酸、肌酸、丙酮酸肌酸能够显著升高肝脏中Asn、Thr、Tyr和Val的含量。本实验表明,丙酮酸、肌酸以及丙酮酸肌酸可通过调节AA肉鸡不同组织中氨基酸的含量,从而间接地改变营养物质在体内的代谢流向3丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸对肉鸡体内相关酶活性的影响试验设计及样品采集同第四章。分别采用试剂盒检测肝脏及血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX).超氧化物歧化酶(CAT)、总抗氧化(T-AOC)能力和丙二醛(MDA)含量,肝脏中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)活性及肌肉中肌酸激酶(CK)活性。结果显示,丙酮酸肌酸降低肝脏中GSH-PX的活性强于肌酸；丙酮酸肌酸、丙酮酸、肌酸都具有一定的总抗氧化能力,但丙酮酸肌酸的总抗氧化能力强于丙酮酸、肌酸；丙酮酸肌酸显著升高肝脏中GOT的活性强于肌酸、丙酮酸；丙酮酸肌酸升高肉鸡腿肌中CK活性的能力强于肌酸,而肌酸又强于丙酮酸。以上结果提示,丙酮酸肌酸对肉鸡的抗氧化保护作用、氨基酸代谢调节作用、能量代谢调节作用强于单独的肌酸或丙酮酸。

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摘要 7-9ABSTRACT 9-11引言 11-13第一篇文献综述 13-35 第一章氨基酸的概述 13-25 1 氨基酸的分类 13-15 1.1 生糖氨基酸 14 1.2 芳香族氨基酸 14-15 1.3 生糖生酮兼生氨基酸 15 1.4 支链氨基酸 15 2 氨基酸的合成 15-16 3 氨基酸的代谢 16-17 3.1 肝脏中氨基酸的代谢 16 3.2 骨骼肌中氨基酸的代谢 16-17 4 氨基酸与生物活性物质 17-21 4.1 谷氨酸与γ-氨基丁酸 18 4.2 牛黄酸与半光氨酸 18-19 4.3 氨基酸与黑色素的形成 19 4.4 酪氨酸与儿茶酚胺类物质 19 4.5 色氨酸与5-羟色胺及吲哚乙酸 19 4.6 肌酸和磷酸肌酸的形成 19 4.7 组胺的形成 19-20 4.8 腐胺、精胺、亚精胺的形成 20-21 参考文献 21-25 第二章丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸的研究概述 25-35 1 丙酮酸的研究进展 25-28 1.1 丙酮酸的合成、代谢、分布 25-26 1.2 丙酮酸的生物学功能 26-28 1.3 丙酮酸在畜牧生产中的应用 28 2 肌酸的研究进展 28-31 2.1 肌酸的合成、代谢、分布 28-29 2.2 肌酸的生物学功能 29-30 2.3 肌酸在畜牧生产中的应用 30-31 3 丙酮酸肌酸的研究进展 31-32 3.1 丙酮酸肌酸的概述 31 3.2 丙酮酸肌酸的生物学功能 31-32 参考文献 32-35第二篇实验研究 35-71 第三章氨基酸反相高效液相色谱检测法的建立 35-43 1 材料与方法 35-36 1.1 仪器与试剂 35-36 1.2 色谱条件 36 1.3 衍生剂 36 1.4 衍生及分析 36 2 结果与分析 36-38 2.1 15种氨基酸的色谱分离图谱 36-37 2.2 标准曲线的制作 37 2.3 精密度的测定 37-38 2.4 样本回收率检测 38 3 讨论 38-39 4 小结 39-41 参考文献 41-43 第四章丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸对肉鸡部分组织中氨基酸谱的影响 43-59 1 材料与方法 44-46 1.1 试验动物 44 1.2 试验分组及样品采集 44-45 1.3 仪器及试剂 45 1.4 色谱工作条件 45 1.5 样品处理 45 1.6 衍生及分析 45 1.7 统计处理 45-46 2 结果与分析 46-53 2.1、丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸对肉鸡血清中氨基酸谱的影响 46-48 2.2 丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸对肉鸡腿肌中氨基酸谱的影响 48-51 2.3 丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸对肉鸡肝脏中氨基酸谱的影响 51-53 3 讨论 53-55 4 小结 55-57 参考文献 57-59 第五章丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸对肉鸡体内相关酶活性 59-71 1 材料与方法 59-61 1.1 试验动物 59-60 1.2 试验分组及样品采集 60 1.3 相关指标检测 60 1.4 统计处理 60-61 2 结果与分析 61-66 2.1 丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸对肉鸡血清及肝脏组织中抗氧化相关酶活性的影响 61-65 2.2 丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸对肉鸡肝脏组织中转氨酶活性的影响 65-66 2.3 丙酮酸、肌酸及丙酮酸肌酸对腿肌中肌酸激酶活性的的影响 66 3 讨论 66-67 4 小结 67-70 参考文献 70-71总体讨论 71-75 参考文献 73-75全文结论 75-77致谢 77

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